熒光素酶(mei)互補實(shi)驗--植物蛋白互作

  我們采用(yong)PCB1300-NLuc和PCB1300-CLuc

載體(ti)，分別將檢測的2個目標(biao)基因序列克隆到(dao)對應載體(ti)上，進行融(rong)合瞬(shun)時表達，如果這個目標(biao)蛋白相互作用，因為親和力作用，則熒(ying)光(guang)(guang)素酶的NLuc和CLuc會靠(kao)近并正(zheng)確組(zu)裝，從而發揮(hui)熒(ying)光(guang)(guang)素酶活性分解底物產生熒(ying)光(guang)(guang)。

Co-IP  

CO-LP實(shi)驗抗體(ti)(ti)和(he)目標(biao)蛋(dan)白(bai)高親和(he)性和(he)特異(yi)性識(shi)別，目標(biao)蛋(dan)白(bai)質(zhi)及(ji)其相(xiang)互作用的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)和(he)抗體(ti)(ti)結合(he)(he)形成復(fu)合(he)(he)物(wu)，在利用蛋(dan)白(bai)A/G瓊脂(zhi)糖等(deng)親和(he)樹脂(zhi)結合(he)(he)抗體(ti)(ti)，將(jiang)復(fu)合(he)(he)物(wu)從混合(he)(he)物(wu)中捕(bu)獲下來，最后(hou)通過洗滌和(he)離心等(deng)步驟將(jiang)復(fu)合(he)(he)物(wu)純化(hua)出來。進行質(zhi)譜分析(xi)、免(mian)疫印跡等(deng)檢測。

pull down

pull down檢測蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)和(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)相互作(zuo)用，挑選相互作(zuo)用的(de)(de)未知蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)。構建目的(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)A原核(he)表達(da)載(zai)體和(he)GST標(biao)簽(qian)做(zuo)融(rong)合(he)表達(da)，構建B蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)原核(he)表達(da)載(zai)體HIS標(biao)簽(qian)做(zuo)融(rong)合(he)表達(da)，分別對兩種蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)進(jin)行純化(hua)，最(zui)后把含A蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)填(tian)料和(he)B純化(hua)液混(hun)合(he)，通過處理后，進(jin)行SDS-PAGE檢測。