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水稻RNA原位雜交檢測技術服務-武漢科銳諾(在線咨詢)

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將少數菌落(luo)轉移到纖維素(su)濾(lv)膜(mo)上(shang)

(1) 在含有選(xuan)擇(ze)性的瓊脂平板上放(fang)一張纖(xian)維素濾膜。

(2) 用無菌牙(ya)簽將各個菌落先轉移至(zhi)(zhi)濾膜(mo)上(shang),再轉移至(zhi)(zhi)含有選擇性(xing)但未(wei)放濾膜(mo)的瓊脂(zhi)主(zhu)平(ping)板(ban)上(shang)。應(ying)按一(yi)(yi)定的格子進行(xing)劃線(xian)接種(或打點)。每菌落應(ying)分(fen)別劃線(xian)于兩個平(ping)板(ban)的相同位(wei)置上(shang)。后,在濾膜(mo)和主(zhu)平(ping)板(ban)上(shang)同時劃一(yi)(yi)個含有非重組質粒的菌落。

(3) 倒置平板,于37℃培養至劃線(xian)的細菌菌落生(sheng)長到0.5-1.0mm的寬度。

(4) 用已裝防水(shui)黑色繪圖墨水(shui)的(de)針頭穿透濾膜(mo)直至(zhi)瓊脂,在(zai)3個以上(shang)的(de)不(bu)對稱位(wei)置(zhi)(zhi)作標記。在(zai)主平板大致(zhi)相同的(de)位(wei)置(zhi)(zhi)上(shang)也作上(shang)標記。

(5) 用Parafilm膜(mo)封好主平板(ban),倒置貯放于(yu)4℃,直至獲得雜交反應的結果。

(6) 裂解細菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。

目前,我國已穩定開展的分子病理技術主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測序技術DNA原位雜交主要用于基因定位、特異基因(如病原微生物基因)檢測等;RNA原位雜交則用于基因表達檢測。原位雜交技術的優點是操作簡單,可直接定位組織,價格低廉,信號穩定,儲存方便,可做組織學評價,是目前應用較多的分子病理技術之一。

tunel流式細(xi)胞(bao)(bao)凋(diao)亡(wang)檢測(ce)(ce)服務通常稱為細(xi)胞(bao)(bao)程序性死1亡(wang),是由基因控制的主動性細(xi)胞(bao)(bao)死1亡(wang)過程。越(yue)來越(yue)多(duo)(duo)數據發現,細(xi)胞(bao)(bao)凋(diao)亡(wang)與(yu)多(duo)(duo)種疾病密切相關,如(ru)癌細(xi)胞(bao)(bao)具有連(lian)續增殖、抵抗(kang)細(xi)胞(bao)(bao)凋(diao)亡(wang)能(neng)力,利(li)用(yong)流式細(xi)胞(bao)(bao)儀分(fen)析細(xi)胞(bao)(bao)凋(diao)亡(wang)可為腫1瘤診斷,療1效評價和預(yu)后預(yu)測(ce)(ce)提供了重要的參考指標。

TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)細胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細胞在凋亡早期過程中細胞核DNA的斷裂情況,其原理是生物素biotinylate標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂DNA的3’-OH末端,并與連接辣根過氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的鏈霉親和素streptavidin特異性結合,后者又與POD底物H2O2、二氨1基聯1苯1胺(DAB)產生深棕色反應,特異準確地定位正在凋亡的細胞,因而在光學顯微鏡下即可觀察凋亡細胞;由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA斷裂,水稻RNA原位雜交檢測技術服務,因而沒有3‘-OH形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細胞樣本(細胞涂片)在單細胞水平上的凋亡原位檢測。還可應用于抗腫1瘤藥的藥1效評價,以及通過雙色法確定細胞類型和分化階段。

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