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原位雜交試驗
收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養,到達所需(xu)要的發(fa)育(yu)時期(qi)時,用(yong)蛋(dan)白酶(mei)去(qu)除卵膜(mo),用(yong)4%多聚(ju)甲醛(quan)固定(ding),在4℃保(bao)(bao)存(cun),染色(se)體原位雜交技術(shu)服務,二十(shi)四小時后(hou)用(yong)50%2%多聚(ju)甲醛(quan)溶液洗,然(ran)后(hou)換成,在-20C 保(bao)(bao)存(cun),待用(yong)(兩天和兩天以(yi)上(shang)的胚胎需(xu)要用(yong)處理,去(qu)除色(se)素(su)。或(huo)者使用(yong)苯锍脲稀溶液培養,可阻斷色(se)素(su)的形(xing)成) 武漢(han)科銳諾生物科技有限公司(si)
雜交結束(shu)后,去除雜交液,立即于(yu)室溫把濾(lv)膜放入大體(ti)積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振(zhen)搖(yao)5分鐘,并將(jiang)濾(lv)膜至少翻轉一次。重復洗 一次,同時應避免膜干涸(he)。
68℃用(yong)300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次(ci),每次(ci)1-1.5小時。此時已可(ke)進行自顯影。如背景很高或實(shi)驗要求(qiu)嚴格的洗膜條件,可(ke)用(yong)300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘(zhong)。
把濾膜放(fang)在紙巾上(shang)于室(shi)溫(wen)晾干后,把濾膜(編號面朝上(shang))放(fang)在一張保(bao)鮮膜上(shang),并在保(bao)鮮膜上(shang)作(zuo)幾個不對(dui)稱的(de)標記,以使濾膜與(yu)性(xing)自顯影片位置對(dui)應(ying)。
用第(di)二張保鮮膜(mo)蓋住(zhu)濾膜(mo)。加X片并加上(shang)增感(gan)屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標記。可從底片上取下透明紙,通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
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