意義

免yi組織(zhi)化學的臨床(chuang)應用(yong)主要包括以(yi)下(xia)幾方面：

（1）的診(zhen)斷(duan)與鑒別診(zhen)斷(duan)；

（2）確定轉移性的原發部位；

（3）對某類進行進一步的病理分(fen)型；

（4）軟(ruan)(ruan)組(zu)織(zhi)的(de)一般需根據正(zheng)確的(de)組(zu)織(zhi)學分(fen)類，因其種類多、組(zu)織(zhi)形態相像，分(fen)子病理(li)技術服務，有時難以區分(fen)其組(zu)織(zhi)來源，應用(yong)多種標(biao)志進(jin)行組(zu)化研究對(dui)軟(ruan)(ruan)組(zu)織(zhi)的(de)診斷是不可缺少(shao)的(de)；

（5）發現微小轉移灶(zao)，有(you)助于臨(lin)床方案的確定(ding)，包括手術范(fan)圍的確定(ding)。

（6）為臨床提供方案的選擇。

原位雜交第二天

1.

1）將探針回收(shou)，放于－20C保存(cun)（通常探針可重復(fu)使用(yong)十次左右(you)）。

2）加入(ru)50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分(fen)鐘，重復(fu)一次。

3）置(zhi)換2XSSCT1ml，60℃，放置(zhi)15分鐘。

4）置(zhi)換(huan)0.2XSSCT1ml，60℃，放置(zhi)30分鐘(zhong)，重(zhong)復(fu)一次。

2.

1）用(yong)MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床(chuang)輕(qing)輕(qing)搖動。

2）室溫下(xia)加1ml 1：2：7溶液(ye)，時間為一(yi)小(xiao)時。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。

既(ji)要充分保留被(bei)測核(he)酸(suan)，（特別(bie)是RNA）不被(bei)降解，又要盡可能維持原有組織或(huo)細胞(bao)的形態結構。

步驟：基本與免1疫(yi)組(zu)織化學技術相似，即(ji)(ji)組(zu)織要(yao)求新(xin)鮮和迅速(su)投(tou)入固定液。固定液為4%多聚甲(jia)醛/0.1 M PBS（PH7.0-7.6），含(han)有(you)1/1000 DEPC。標(biao)本較(jiao)大時用刀片(pian)切成厚(hou)度不(bu)超過4mm的小(xiao)塊，固定1小(xiao)時即(ji)(ji)可，較(jiao)大的標(biao)本固定不(bu)要(yao)超過2小(xiao)時。某些組(zu)織對過度固定尤其敏感(gan)，如動物大腦，固定時間30-40分鐘(zhong)，一般不(bu)要(yao)超過1小(xiao)時。取(qu)材過程中避(bi)免手(shou)指、唾液和未經RNA酶(mei)抑(yi)制(zhi)處理的器具接觸標(biao)本。冷凍切片(pian)以厚(hou)5~30um佳(jia)，40℃烤箱內干燥2小(xiao)時后儲存在-80℃超低溫(wen)冰箱，在-20℃可保存２～３周，在-70℃可保存數月(yue)之久(jiu)。