原位雜交是在分子生物學領域應用極為廣泛的實驗技術之一，是在研究生物體發育過程中的一種極為重要的分子遺傳學的研究方法。其英文名為in situ hybridization，其中in situ為拉丁文，原位雜交，原義是'in its natural ition'. 字面的意思理解就是說在其原來的天然的位置處雜交。原位雜交主要是基于以下這個主要原理：單鏈的DNA或者RNA只要他們的序列是互補的，即符合AT，CG的堿基配對原則，那么這樣的兩條核酸鏈之間（DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA）就可以形成一個穩定的雜交復合體。

菌落的裂解及(ji)DNA結合(he)于(yu)纖(xian)維素(su)濾膜

（1） 在一張(zhang)保(bao)鮮(xian)膜(mo)(mo)上(shang)(shang)制作一個(ge)裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上(shang)(shang)，將濾膜(mo)(mo)放(fang)到小洼上(shang)(shang)，熒光原(yuan)位(wei)雜交，展平保(bao)鮮(xian)膜(mo)(mo)，染色(se)體熒光原(yuan)位(wei)雜交，使濾膜(mo)(mo)均勻濕潤，讓濾膜(mo)(mo)留于(yu)原(yuan)處2-3分鐘(zhong)。

（2） 用干紙巾從濾膜的(de)下方(fang)吸干濾膜，用一張新(xin)的(de)保鮮(xian)膜和新(xin)配(pei)制的(de)0.5mol/L NaOH重復步驟（1）。

（3） 吸(xi)干(gan)濾膜(mo)，將(jiang)濾膜(mo)轉移到新(xin)的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜(mo)洼上。5分鐘(zhong)后吸(xi)干(gan)濾膜(mo)，再(zai)重復一次(ci)該步驟。

（4） 吸(xi)干(gan)濾膜(mo)，把它轉移到(dao)有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保(bao)鮮(xian)膜(mo)小(xiao)洼上5分(fen)鐘后吸(xi)干(gan)濾膜(mo)，轉移到(dao)一張(zhang)干(gan)的濾紙(zhi)上，置(zhi)于室溫20-30分(fen)鐘，使濾膜(mo)干(gan)燥。

（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真(zhen)空烤(kao)箱中(zhong)于80℃干烤(kao)2小時，固定DNA。

（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。

植物原位雜(za)交的應用包括：

研究(jiu)基因表(biao)達：通過觀察熒光信號的(de)位(wei)置和數量(liang)，可以確(que)定(ding)目標基因在(zai)植物組織中的(de)表(biao)達模式和位(wei)置。

染色體(ti)定(ding)(ding)位：將目標基(ji)因與染色體(ti)中的特定(ding)(ding)位置(zhi)進行比(bi)較，可以(yi)確定(ding)(ding)目標基(ji)因在染色體(ti)中的位置(zhi)和分布。

基(ji)因：通過原位雜交技術，植(zhi)物原位雜交，可以確定目標基(ji)因的序列和(he)位置，為(wei)基(ji)因提供重要(yao)的參考(kao)信息(xi)。

檢(jian)測(ce)物(wu)種(zhong)或(huo)(huo)品(pin)種(zhong)特異(yi)性：通(tong)過(guo)原位雜交技(ji)術(shu)可以(yi)檢(jian)測(ce)出不同物(wu)種(zhong)或(huo)(huo)品(pin)種(zhong)之間基因表達的(de)差異(yi)，從而為物(wu)種(zhong)或(huo)(huo)品(pin)種(zhong)特異(yi)性研究提供依據。

遺傳(chuan)育種(zhong)：通過原位雜交技術(shu)可以檢(jian)測出(chu)不同(tong)品種(zhong)之間基因表達的差(cha)異(yi)，從(cong)而(er)為(wei)遺傳(chuan)育種(zhong)提供(gong)重要的參考信息。

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