預雜交

1）每個管中置換成(cheng)大約300ulHYB－溶液，60℃水(shui)浴5分鐘，避免振蕩。

2）用(yong)等體積的(de)HYB＋取代HYB－。

3）60℃水浴，原(yuan)位雜(za)交，預雜(za)交4小(xiao)時以上。

雜交

1）吸去預雜交的(de)HYB＋，加上100ul已加入探(tan)針的(de)HYB＋溶液(ye)（探(tan)針濃度約為1ng/ul）..

2）60℃ 溫浴過夜(ye)。

 注：雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結合越好，溫度越高，背景越小。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結合，原位雜交檢測，雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，染色體原位雜交，再用與熒光素分子偶聯的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.

原位雜交技術(shu)在許多領域(yu)都有(you)應用(yong)，以下(xia)是其(qi)中(zhong)幾個(ge)具體應用(yong)：

細(xi)(xi)胞生物學(xue)(xue)和(he)發(fa)育生物學(xue)(xue)：在細(xi)(xi)胞生物學(xue)(xue)和(he)發(fa)育生物學(xue)(xue)領(ling)域，原位(wei)雜(za)交技術常(chang)被用于(yu)研究基因的(de)(de)表達和(he)定(ding)(ding)位(wei)。例如(ru)，通過(guo)標(biao)記特(te)定(ding)(ding)基因的(de)(de)探針，可以在細(xi)(xi)胞或組(zu)織(zhi)中(zhong)檢測特(te)定(ding)(ding)基因序列的(de)(de)存在和(he)分布(bu)，進而(er)了解基因在細(xi)(xi)胞分化、發(fa)育和(he)功能中(zhong)的(de)(de)作用。

基(ji)因(yin)(yin)組學和遺傳學研究：原位(wei)雜交技(ji)術也(ye)可用于基(ji)因(yin)(yin)組學和遺傳學研究。例(li)如，通過標記多個基(ji)因(yin)(yin)探(tan)針(zhen)，可以檢測基(ji)因(yin)(yin)組中的(de)多個基(ji)因(yin)(yin)序列(lie)，從(cong)而進行基(ji)因(yin)(yin)定位(wei)、基(ji)因(yin)(yin)表達譜分析(xi)、基(ji)因(yin)(yin)突變檢測等研究。

病(bing)毒學(xue)和病(bing)原(yuan)微生(sheng)物研究：在病(bing)毒學(xue)和病(bing)原(yuan)微生(sheng)物學(xue)領(ling)域，原(yuan)位(wei)雜(za)交技術常被用(yong)于(yu)檢(jian)測和定位(wei)病(bing)毒、細菌等病(bing)原(yuan)微生(sheng)物。例如，植物原(yuan)位(wei)雜(za)交，通過標(biao)記特異性或核酸探針(zhen)，可以檢(jian)測組(zu)織(zhi)中病(bing)原(yuan)微生(sheng)物的存在、情況(kuang)以及分布特征(zheng)，從而為疾病(bing)的預防、診斷和提(ti)供依據。

總之，原位(wei)雜交技術在生物(wu)學、醫學、基因組學、遺傳學、病(bing)毒學和病(bing)原微(wei)生物(wu)學等領(ling)域都有(you)廣泛的(de)應用價值(zhi)，為人類認識生命現象、探究疾病(bing)機(ji)制和提(ti)供了(le)有(you)力的(de)技術支持。

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