原位雜交第三天

1）        用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，原位雜交，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。

2）        用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。

3）將胚胎轉入十六孔板中，吸去staining buffer，原位雜交服務，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。

4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色

5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，原位雜交技術，拍照。

6）4C冰箱保存。

原位雜交技術是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規則與組織細胞內待測的核酸復性結合而使得組織細胞中的特異性核酸得到定位，并通過探針上所標記的檢測系統將其在核酸的原有位置上顯示出來。經特定標記的核苷酸鏈為探針，可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢DNA片段或mRNA進行雜交，然后顯示標記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術可研究各種基因在染色體上的定位，原位雜交技術服務，編碼某種蛋白質的mRNA在胞質中的表達。

原位雜交技術方法大致可分為：1.雜交前準備，包括固定、取材、玻片和組織的處理，如何增強核酸探針的穿透性、減低背景染色等；2.雜交；3.雜交后處理；4.顯示（visualization）：包括性自顯影和非性標記的顯色。固定原位雜交組織化學技術在固定劑的應用和選擇上應兼顧到三個方面：保持細胞結構，限度地保持細胞內DNA或RNA的水平；使探針易于進入細胞或組織。DNA是比較穩定的，mRNA是相對穩定的但易為酶合成和降解。RNA卻絕然不同，非常容易被降解。因此，對于DNA的定位來說，固定劑的種類和濃度并不十分重要。相反，在RNA的定位上，如果要使RNA的降解減少到低限度，那么，不僅固定劑的種類濃度和固定的時間十分重要，而且取材后應盡快予以冷凍或固定。

原位雜交-原位雜交技術服務-貝科新肽(推薦商家)由武漢貝科新肽科技有限公司提供。武漢貝科新肽科技有限公司實力不俗，信譽可靠，在湖北 武漢 的化學試劑等行業積累了大批忠誠的客戶。貝科新肽帶著精益求精的工作態度和不斷的完善創新理念和您攜手步入輝煌，共創美好未來！