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雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,染色體原位雜交,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。

FISH是原位雜交技術大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質標記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發明,現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環境構成污染,靈敏度能得到保障,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。

植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)組織原(yuan)位雜交技術在植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)基(ji)因表達(da)(da)(da)和調控(kong)研究(jiu)中(zhong)(zhong)具有廣泛的應(ying)用。它可以(yi)用來研究(jiu)植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)發育、生長(chang)、逆(ni)境響應(ying)等(deng)方(fang)面(mian)的基(ji)因表達(da)(da)(da)模式和調控(kong)機(ji)制。例(li)如,可以(yi)利用該技術研究(jiu)植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)中(zhong)(zhong)的轉錄因子(zi)、信號轉導通路、代謝(xie)途徑等(deng)基(ji)因的表達(da)(da)(da)和調控(kong)。此外(wai),植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)組織原(yuan)位雜交技術還可以(yi)用來鑒定植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)中(zhong)(zhong)的病原(yuan)體、檢測植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)等(deng)方(fang)面(mian)。

總(zong)之植物組織(zhi)原位雜交(jiao)技(ji)(ji)術是(shi)一(yi)種(zhong)重要的分(fen)子生(sheng)物學(xue)技(ji)(ji)術,可以用來研究植物基因的表達和(he)調(diao)控。它(ta)具(ju)有操作(zuo)簡便、結果可靠、應用廣泛等優(you)點,是(shi)植物分(fen)子生(sheng)物學(xue)研究中不可或缺(que)的工具(ju)。

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