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原位(wei)雜交(jiao)是一(yi)項非常(chang)重要的(de)生物技術,可以(yi)用于(yu)研究基因(yin)表達和(he)(he)調控,檢測基因(yin)變(bian)異和(he)(he)染色(se)體異常(chang),監測細胞生長和(he)(he)凋亡,以(yi)及識別特定的(de)細胞類(lei)型或組(zu)織(zhi)。然而,它需要特殊的(de)操作技術和(he)(he)設備,以(yi)及嚴格的(de)對照實驗(yan)才能獲得可靠的(de)結果。
多彩色熒光原位雜交技術多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization,mFISH)是在熒光原位雜交技術的基礎上發展起來的一種新技術,它用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交,能同時檢測多個靶位,各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同,植物原位雜交,呈現多種色彩,因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術的局限,能同時檢測多個基因,在檢測遺傳物質的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應用在原(yuan)位雜(za)交過(guo)程(cheng)中(zhong),需(xu)要使用標記的(de)核(he)(he)酸(suan)探(tan)針(zhen),通(tong)常是(shi)在性核(he)(he)素或(huo)非性物(wu)質中(zhong)標記的(de)。這些探(tan)針(zhen)可(ke)以通(tong)過(guo)不同的(de)方式制備(bei),例(li)如從已知序(xu)列(lie)的(de)DNA或(huo)RNA制備(bei),或(huo)者通(tong)過(guo)使用生物(wu)信息學方法設計和(he)合(he)成(cheng)新的(de)探(tan)針(zhen)。
在進(jin)行(xing)(xing)原(yuan)位雜(za)交(jiao)(jiao)時(shi),細(xi)胞或(huo)組(zu)織需要固定在適(shi)當的支持物上,例如載(zai)玻片。然后,染色體熒光原(yuan)位雜(za)交(jiao)(jiao),探針(zhen)與細(xi)胞或(huo)組(zu)織中的DNA或(huo)RNA進(jin)行(xing)(xing)雜(za)交(jiao)(jiao),通常是在加熱(re)條件下(xia)進(jin)行(xing)(xing)的。接(jie)下(xia)來,通過洗滌和顯影步(bu)驟去除未結合的探針(zhen)和信(xin)號增強劑,后用顯微鏡(jing)觀察(cha)雜(za)交(jiao)(jiao)信(xin)號的位置。
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