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湖北熒光原位雜交-貝科新肽(推薦商家)

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同一樣本(ben)可以多次做原位雜交實(shi)驗嗎(ma)?

一般情況下,如(ru)(ru)果(guo)操作沒有(you)得到理(li)想的結果(guo),是(shi)可(ke)以將探(tan)針洗滌(di)然后進行(xing)再次的雜交的。如(ru)(ru)果(guo)使(shi)用的是(shi)直標型(xing)探(tan)針,還可(ke)以使(shi)用不同(tong)探(tan)針對同(tong)一樣本進行(xing)反復雜交。針對不同(tong)的樣本,處理(li)方法(fa)略有(you)不同(tong)。

原位雜交實操中哪(na)些因素比較重(zhong)要?

重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度,所以探針要避光保存,其已經雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,熒光原位雜交,這也直接關系到原位雜交的穩定性。

和其它實驗方法一樣,必須同時設對照試驗以證明其實驗結果特異性。對照試驗的設置須根據核酸探針和靶核苷酸的種類和現有的可能條件去選定。ISHH的優點是它的高度特異性,它可測定組織、培養的單個細胞或細胞提取物中的核苷酸含量。應用高敏感度的性標記cRNA探針在理想的ISHH的實驗條件下檢測mRNA,其敏感度可達到20個mRNA拷貝/每個細胞。由于雙鏈DNA的穩定性,在用ISHH定位DNA時很少發生丟失,降解,其敏感性高到能夠顯示在染色體鋪片上,有時甚至在組織切片上的單個基因拷貝。正因為如此,對ISHH結果的解釋應持慎重態度,特別是前人未報告過的新發現。

原位雜交技術的原理是什么?有何用途

原(yuan)(yuan)位雜(za)交技術的(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)理(li)是利用(yong)核(he)酸(suan)(suan)分子單鏈之間有互補的(de)(de)(de)堿(jian)基序(xu)列,將(jiang)有性或(huo)非性的(de)(de)(de)外源核(he)酸(suan)(suan)(即探(tan)(tan)針(zhen)(zhen))與組(zu)織(zhi)、細胞(bao)或(huo)染色體(ti)上待測DNA或(huo)RNA互補配(pei)對,結(jie)合成專(zhuan)一的(de)(de)(de)核(he)酸(suan)(suan)雜(za)交分子,經一定(ding)的(de)(de)(de)檢測手段將(jiang)待測核(he)酸(suan)(suan)在組(zu)織(zhi)、細胞(bao)或(huo)染色體(ti)上的(de)(de)(de)位置顯(xian)示出來。為顯(xian)示特定(ding)的(de)(de)(de)核(he)酸(suan)(suan)序(xu)列要具備3個(ge)重要條件:組(zu)織(zhi)、細胞(bao)或(huo)染色體(ti)的(de)(de)(de)固(gu)定(ding)、具有能與特定(ding)片段互補的(de)(de)(de)核(he)苷酸(suan)(suan)序(xu)列(即探(tan)(tan)針(zhen)(zhen))、有與探(tan)(tan)針(zhen)(zhen)結(jie)合的(de)(de)(de)標記物(曾呈奎等2000)。

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