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先生: |
同一樣本(ben)可以多次做原位雜交實(shi)驗嗎(ma)?
一般情況下,如(ru)(ru)果(guo)操作沒有(you)得到理(li)想的結果(guo),是(shi)可(ke)以將探(tan)針洗滌(di)然后進行(xing)再次的雜交的。如(ru)(ru)果(guo)使(shi)用的是(shi)直標型(xing)探(tan)針,還可(ke)以使(shi)用不同(tong)探(tan)針對同(tong)一樣本進行(xing)反復雜交。針對不同(tong)的樣本,處理(li)方法(fa)略有(you)不同(tong)。
原位雜交實操中哪(na)些因素比較重(zhong)要?
重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度,所以探針要避光保存,其已經雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,熒光原位雜交,這也直接關系到原位雜交的穩定性。
原位雜交技術的原理是什么?有何用途
原(yuan)(yuan)位雜(za)交技術的(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)理(li)是利用(yong)核(he)酸(suan)(suan)分子單鏈之間有互補的(de)(de)(de)堿(jian)基序(xu)列,將(jiang)有性或(huo)非性的(de)(de)(de)外源核(he)酸(suan)(suan)(即探(tan)(tan)針(zhen)(zhen))與組(zu)織(zhi)、細胞(bao)或(huo)染色體(ti)上待測DNA或(huo)RNA互補配(pei)對,結(jie)合成專(zhuan)一的(de)(de)(de)核(he)酸(suan)(suan)雜(za)交分子,經一定(ding)的(de)(de)(de)檢測手段將(jiang)待測核(he)酸(suan)(suan)在組(zu)織(zhi)、細胞(bao)或(huo)染色體(ti)上的(de)(de)(de)位置顯(xian)示出來。為顯(xian)示特定(ding)的(de)(de)(de)核(he)酸(suan)(suan)序(xu)列要具備3個(ge)重要條件:組(zu)織(zhi)、細胞(bao)或(huo)染色體(ti)的(de)(de)(de)固(gu)定(ding)、具有能與特定(ding)片段互補的(de)(de)(de)核(he)苷酸(suan)(suan)序(xu)列(即探(tan)(tan)針(zhen)(zhen))、有與探(tan)(tan)針(zhen)(zhen)結(jie)合的(de)(de)(de)標記物(曾呈奎等2000)。
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