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生物領(ling)域應用(yong)原位雜交技術的例(li)子:
基因(yin)表達(da)和調(diao)控研究(jiu)(jiu):原(yuan)位(wei)雜交(jiao)技術可以(yi)用于研究(jiu)(jiu)基因(yin)表達(da)的調(diao)控機制。例如,可以(yi)標記特定基因(yin)的探針(zhen),檢測該基因(yin)在不同環境、不同生長條(tiao)件下的表達(da)情(qing)況,進而研究(jiu)(jiu)其(qi)表達(da)調(diao)控機制。
細(xi)(xi)(xi)胞(bao)分(fen)化(hua)(hua)(hua)與發(fa)育(yu)研(yan)究:在細(xi)(xi)(xi)胞(bao)分(fen)化(hua)(hua)(hua)與發(fa)育(yu)研(yan)究中,原位(wei)(wei)雜交(jiao)技術(shu)常被(bei)用(yong)于(yu)檢(jian)(jian)測(ce)和(he)定(ding)位(wei)(wei)特(te)定(ding)基(ji)因的(de)(de)表達情(qing)況(kuang),進而了解細(xi)(xi)(xi)胞(bao)分(fen)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)過程和(he)機制(zhi)。例如,可以標記(ji)與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)分(fen)化(hua)(hua)(hua)相關的(de)(de)基(ji)因探針,植物原位(wei)(wei)雜交(jiao),檢(jian)(jian)測(ce)該基(ji)因在不同(tong)組織、不同(tong)發(fa)育(yu)階段的(de)(de)表達情(qing)況(kuang)。
原位雜交第三天
1) 用(yong)1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換(huan)(huan)溶液,放置搖床上25分(fen)鐘,然后用(yong)1mlMABT置換(huan)(huan),25分(fen)鐘,原位雜交,再用(yong)1mlMABT溶液置換(huan)(huan),一小時以上,后用(yong)1mlMABT溶液置換(huan)(huan),25分(fen)鐘。
2) 用1ml 1mM左(zuo)旋(xuan)米(mi)睉的Staining buffer洗(xi)三次(ci),每次(ci)放置(zhi)五分鐘。
3)將胚(pei)胎(tai)轉入(ru)十六孔板中(zhong),吸去staining buffer,加(jia)(jia)上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加(jia)(jia)5mM左旋米唑),十六孔板外面(mian)包上錫箔紙以(yi)避光,避免搖動,室溫下(xia)顯色。
4)每隔一(yi)小時觀察胚胎是否開始顯色
5)將顯(xian)色完全的胚胎中的底物吸出,用PBST洗(xi)兩三次后加上4%多聚(ju)甲(jia)醛固定,染色體原(yuan)位雜(za)交,拍照。
6)4C冰箱保存。
原位(wei)雜交技術還在以(yi)下生物領域有(you)應用:
細(xi)胞化(hua)學和(he)學:原位(wei)雜交技術可(ke)以用于(yu)研究細(xi)胞內特(te)定(ding)化(hua)學物(wu)質(zhi)(zhi)的(de)定(ding)位(wei)和(he)分布,例(li)(li)如(ru)檢測(ce)(ce)細(xi)胞內酶、、神經遞質(zhi)(zhi)等物(wu)質(zhi)(zhi)的(de)分布和(he)定(ding)位(wei)。此外(wai),還可(ke)以應用于(yu)學研究,原位(wei)雜交檢測(ce)(ce),例(li)(li)如(ru)檢測(ce)(ce)細(xi)胞、分子的(de)分布和(he)定(ding)位(wei)等。
神經科學:在神經科學領域,原位雜交技術常被用于研究神經元的生長、發育和連接等過程。例如,通過標記特定基因的探針,可以檢測神經元中特定基因的表達和定位,進而研究其在神經信號傳遞、神經環路形成等方面的作用。
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