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核酸(suan)原位雜(za)交(jiao)可根據其檢測物而分(fen)為(wei)細(xi)胞(bao)內(nei)原位雜(za)交(jiao)和組織切(qie)片(pian)內(nei)原位雜(za)交(jiao);根據其所用探針及(ji)所要檢測核酸(suan)的不同又可分(fen)為(wei)DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜(za)交(jiao)。但不論哪種雜(za)交(jiao)都(dou)必須經過組織細(xi)胞(bao)的固定,預雜(za)交(jiao),雜(za)交(jiao),沖(chong)等(deng)一系列(lie)洗步(bu)驟及(ji)自顯影(ying)或酶法顯色(se)以顯示雜(za)交(jiao)結(jie)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,熒光原位雜交,不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,
原位雜交第三天
1) 用(yong)1ml含10%熱滅清的MABT溶液(ye)置(zhi)換溶液(ye),放(fang)置(zhi)搖床上25分鐘(zhong),然后用(yong)1mlMABT置(zhi)換,25分鐘(zhong),原位雜(za)(za)交檢測,再用(yong)1mlMABT溶液(ye)置(zhi)換,一小(xiao)時以(yi)上,后用(yong)1mlMABT溶液(ye)置(zhi)換,原位雜(za)(za)交,25分鐘(zhong)。
2) 用1ml 1mM左旋米睉的(de)Staining buffer洗三次,每次放(fang)置五分(fen)鐘。
3)將胚胎轉入十(shi)六孔板中,吸去staining buffer,加上(shang)300ul BM Purple AP Substrate(底物,用(yong)之前(qian)加5mM左旋米唑),十(shi)六孔板外(wai)面包(bao)上(shang)錫箔紙以避光,避免搖動,室溫下顯(xian)色(se)。
4)每(mei)隔一(yi)小時(shi)觀察胚胎(tai)是否(fou)開(kai)始顯色
5)將顯色(se)完(wan)全的(de)胚胎中的(de)底物(wu)吸出,用PBST洗兩三次后加(jia)上4%多(duo)聚甲醛(quan)固定,拍照。
6)4C冰箱保存。
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