一. 原位雜交天

1. 重(zhong)新水化(hua)和固定

1） 吸取固(gu)定(ding)好的胚胎，加入50%的PBST溶(rong)液，放(fang)置5分鐘(zhong)。

2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘

3） 置換(huan)成PBST溶液(ye)，放(fang)置5分(fen)鐘，重復一次(ci)

4） 置換成(cheng)4％多聚甲醛(quan)的PBS溶液固定20分鐘

5） 用PBST洗兩次(ci)，每次(ci)放(fang)置五分鐘，室溫。

 蛋白酶(mei)處理(li)與后固定（本實驗(yan)不(bu)做此步）

1） 用(yong)10ul/ml的(de)蛋(dan)白酶K在室溫(wen)下處(chu)(chu)理(li)(li)胚(pei)胎(tai)。5體節以(yi)(yi)(yi)下的(de)胚(pei)胎(tai)不處(chu)(chu)理(li)(li)，5體節到24小時(shi)的(de)胚(pei)胎(tai)處(chu)(chu)理(li)(li)3分鐘，24小時(shi)以(yi)(yi)(yi)上的(de)胚(pei)胎(tai)處(chu)(chu)理(li)(li)5分鐘或(huo)(huo)者更長(chang)。發育時(shi)間越(yue)短的(de)胚(pei)胎(tai)越(yue)嫩，可以(yi)(yi)(yi)不用(yong)或(huo)(huo)者少(shao)用(yong)蛋(dan)白酶處(chu)(chu)理(li)(li)，發育時(shi)間長(chang)的(de)胚(pei)胎(tai)就需要用(yong)蛋(dan)白酶來疏松組織，動物組織原位雜交，以(yi)(yi)(yi)便于雜交。

2） 用PBST溶(rong)液輕(qing)洗，在PBST中放置5分鐘(zhong)。

3） 用4％多聚(ju)甲醛的PBS溶液固定20分(fen)鐘，室溫。

4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫(wen)。

在原位雜交過程(cheng)中，需要使用(yong)標(biao)記的(de)核酸探針，通(tong)常是在性核素或(huo)非性物質中標(biao)記的(de)。這些探針可(ke)以通(tong)過不同的(de)方(fang)式制(zhi)備，例如(ru)從已知序列的(de)DNA或(huo)RNA制(zhi)備，或(huo)者(zhe)通(tong)過使用(yong)生(sheng)物信息學方(fang)法設計和合成新的(de)探針。

在(zai)進(jin)行(xing)原(yuan)位雜(za)(za)交時，細胞或組織需要固(gu)定在(zai)適(shi)當(dang)的(de)支持物上(shang)，例如載玻(bo)片(pian)。然后，探針與細胞或組織中的(de)DNA或RNA進(jin)行(xing)雜(za)(za)交，通常是在(zai)加熱條(tiao)件下進(jin)行(xing)的(de)。接(jie)下來，通過洗滌和顯影步驟去除未結合的(de)探針和信(xin)號(hao)增強劑(ji)，后用顯微鏡觀(guan)察雜(za)(za)交信(xin)號(hao)的(de)位置。