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熒光原(yuan)位雜交(FISH)技術(shu)具有以下優點:
可多重(zhong)染色:利(li)用不(bu)同(tong)的熒光(guang)染料(liao)標記不(bu)同(tong)的探針,可以實現多重(zhong)熒光(guang)原位(wei)雜(za)交,從(cong)而同(tong)時檢測多個序列(lie),提高實驗(yan)效率了。
高度創新性和性:FISH技術不僅可以用于研究已知基因或序列的染色體定位,還可以用于未基因或遺傳標記及染色體畸變的研究,在基因定性、定量、整合、表達等方面的研究中頗具優勢。
組織原(yuan)位雜交(jiao)(Tissue in situ hybridization),即原(yuan)位雜交(jiao)組織化學技(ji)(ji)術和原(yuan)位雜交(jiao)細胞化學技(ji)(ji)術
原位(wei)雜交技(ji)術的基(ji)本原理(li)
利(li)用核酸分子單鏈(lian)之間(jian)有互補的堿(jian)基(ji)順序,通過堿(jian)基(ji)對之間(jian)非(fei)共價鍵的形成,出現穩(wen)定的雙(shuang)鏈(lian)區,形成雜交的雙(shuang)鏈(lian)。
1.兩條核(he)苷酸單鏈(lian)片段,在(zai)適宜的條件(jian)下,通(tong)過(guo)氫鍵(jian)結合(he),形成DNA-DNA、DNA一(yi)RNA或RNA一(yi)RNA雙鍵(jian)分子
2.應用帶有(you)(you)標記的(de)(有(you)(you)性(xing)同位素,如(ru)3H、35S、32P,熒(ying)光素、生物素、等非性(xing)物質)DNA或RNA片段作為(wei)核(he)酸(suan)探(tan)針(zhen),與組織切片或細(xi)胞內待測(ce)核(he)酸(suan)(RNA或DNA)片段進行雜交
3.用自顯影等方法(fa)予以顯示,在光鏡(jing)(jing)或電(dian)鏡(jing)(jing)下(xia)觀察目(mu)的(de)mRNA或DNA的(de)存在與定位
用原位(wei)(wei)雜交(jiao)術,可在原位(wei)(wei)研究細(xi)胞(bao)合(he)成某(mou)種(zhong)多肽或蛋白(bai)質的基(ji)因表達。
此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
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