在(zai)(zai)(zai)酵母雙雜交系統中，BD與X蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)融合(he)，AD與Y蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)融合(he)，如(ru)果X、Y之間形(xing)成(cheng)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)-蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)復合(he)物，AD與BD會在(zai)(zai)(zai)空間上(shang)(shang)充分接近，重新構成(cheng)結構域，啟(qi)動報告(gao)基因的(de)(de)轉錄。擁(yong)有(you)BD質粒(li)的(de)(de)酵母可以在(zai)(zai)(zai)某一缺陷培(pei)養(yang)基上(shang)(shang)生(sheng)長(chang)，擁(yong)有(you)AD質粒(li)的(de)(de)酵母菌可以在(zai)(zai)(zai)另一種缺陷培(pei)養(yang)基上(shang)(shang)生(sheng)長(chang)，通(tong)過接合(he)（mating）或共轉化使酵母同(tong)時(shi)擁(yong)有(you)AD與BD質粒(li)。如(ru)果BD上(shang)(shang)的(de)(de)目的(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)與AD上(shang)(shang)的(de)(de)誘餌蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)存在(zai)(zai)(zai)相互作用，這(zhe)樣(yang)的(de)(de)酵母可以在(zai)(zai)(zai)三缺及(ji)四缺的(de)(de)培(pei)養(yang)基上(shang)(shang)生(sheng)長(chang)，并啟(qi)動β-半乳糖苷酶基因的(de)(de)轉錄。

熒光定量PCR(realtimePCR)技術是近幾年基于普通PCR技術發展的一種新技術。它借助熒光信號來檢測PCR產物，通過熒光染料或熒光標記的特異探針，對PCR產物進行標記跟蹤，在擴增過程中，每經過一次循環，熒光定量PCR儀就會收集一次熒光信號，實時檢測整個PCR進程。用熒光定量PCR法檢測目的基因僅需檢測樣本是否具有擴增信號即可，且PCR反應具有核酸擴增的高1效性，可檢測出微小突變。根據探針標記不同可分為TaqMan探針法和AＲMS法。

阻斷內(nei)源性過氧化物酶：滴加3%1甲1醇-H2O2，室溫(wen)避光孵育15min，將(jiang)玻片置(zhi)于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

預雜交：滴(di)加預雜交液，37°C孵(fu)育(yu)1h。

雜交：傾去預雜交液(ye)，滴加含探針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交液(ye)，濃度6ng/ul，恒溫箱37度雜交過夜。

雜交后洗滌(di)：洗去雜交液，tunel技術服務，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌(di)。

滴(di)加(jia)(jia)封(feng)閉(bi)液：滴(di)加(jia)(jia)封(feng)閉(bi)血(xue)1清（正常(chang)兔血(xue)1清），室溫30min。

滴(di)加鼠抗地(di)1高辛標記過氧化物酶（anti-DIG-HRP）：傾去封閉液，滴(di)加anti-DIG-HRP。37°C孵育(yu)50min，后PBS洗3次×5min。

        

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