多彩色熒光原位雜交技術多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization，mFISH)是在熒光原位雜交技術的基礎上發展起來的一種新技術，染色體原位雜交，它用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交，能同時檢測多個靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現多種色彩，因而被稱為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術的局限，能同時檢測多個基因，在檢測遺傳物質的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應用

以(yi)菌(jun)落原(yuan)位雜交為(wei)例：對分散在若干個瓊脂(zhi)平(ping)(ping)板(ban)上(shang)的少數(shu)菌(jun)落（100-200）進(jin)(jin)行篩選(xuan)時，可采用該方法。將這些菌(jun)落歸(gui)并到一個瓊脂(zhi)主平(ping)(ping)板(ban)以(yi)及已置于(yu)第(di)二(er)個瓊脂(zhi)平(ping)(ping)板(ban)表面的一張纖維(wei)素濾膜上(shang)。經培養一段時間后，對菌(jun)落進(jin)(jin)行原(yuan)位裂解(jie)。主平(ping)(ping)板(ban)應貯存于(yu)4℃直至得(de)到篩選(xuan)結(jie)果。

將少(shao)數菌落轉(zhuan)移到纖維素濾膜上(shang)

（1） 在含有選擇性(xing)的瓊脂平板上放(fang)一張纖(xian)維素濾膜。

（2） 用無菌(jun)牙簽將各個(ge)(ge)菌(jun)落(luo)先轉移至濾(lv)(lv)膜上(shang)(shang)，再轉移至含(han)(han)有(you)選擇性但(dan)未(wei)放濾(lv)(lv)膜的(de)瓊(qiong)脂主平(ping)板上(shang)(shang)。應按一(yi)定的(de)格子(zi)進行劃(hua)線(xian)接(jie)種（或打點）。每菌(jun)落(luo)應分別劃(hua)線(xian)于兩(liang)個(ge)(ge)平(ping)板的(de)相同位置上(shang)(shang)。后，在濾(lv)(lv)膜和主平(ping)板上(shang)(shang)同時(shi)劃(hua)一(yi)個(ge)(ge)含(han)(han)有(you)非重(zhong)組質粒的(de)菌(jun)落(luo)。

（3） 倒置平板，于37℃培養至劃線(xian)的細菌(jun)菌(jun)落生長到0.5-1.0mm的寬(kuan)度(du)。

（4） 用已裝防水(shui)黑色繪圖(tu)墨水(shui)的針(zhen)頭穿透濾膜直至瓊脂，在(zai)(zai)3個(ge)以上的不(bu)對稱(cheng)位置(zhi)(zhi)作標記。在(zai)(zai)主平(ping)板(ban)大致相同的位置(zhi)(zhi)上也(ye)作上標記。

（5） 用Parafilm膜封(feng)好(hao)主平板，倒置貯(zhu)放于4℃，直至獲得雜交反應的(de)結果。

（6） 裂(lie)解細菌，按(an)本段下面(mian)所述(shu)方法，使釋放的DNA結合(he)于(yu)纖維素濾膜。

FISH是原位雜交技術大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質標記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末 被發明，現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環境構成污染，靈敏度能得到保障，可進行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。

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