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組織(zhi)原位(wei)(wei)雜(za)交(jiao)(jiao)(jiao)(Tissue in situ hybridization),即原位(wei)(wei)雜(za)交(jiao)(jiao)(jiao)組織(zhi)化學技術(shu)和(he)原位(wei)(wei)雜(za)交(jiao)(jiao)(jiao)細胞化學技術(shu)
原位雜(za)交技術(shu)的基本原理
利用核酸分子單鏈(lian)之(zhi)間有互補的堿(jian)基順序,通過堿(jian)基對(dui)之(zhi)間非共價鍵(jian)的形成,出現穩定的雙鏈(lian)區,形成雜交的雙鏈(lian)。
1.兩條核苷酸單(dan)鏈片(pian)段,在適宜的條件下,通過氫鍵(jian)結合,形成(cheng)DNA-DNA、DNA一(yi)RNA或(huo)RNA一(yi)RNA雙鍵(jian)分(fen)子(zi)
2.應用帶有標記的(有性(xing)同位(wei)素(su)(su),如3H、35S、32P,染色(se)體原位(wei)雜交,熒光素(su)(su)、生(sheng)物(wu)素(su)(su)、等(deng)非(fei)性(xing)物(wu)質)DNA或(huo)(huo)RNA片(pian)段(duan)作(zuo)為核酸探針,與組織切片(pian)或(huo)(huo)細(xi)胞內待測核酸(RNA或(huo)(huo)DNA)片(pian)段(duan)進行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示,在(zai)光鏡或電鏡下(xia)觀察(cha)目的mRNA或DNA的存(cun)在(zai)與定位
用原(yuan)位(wei)雜交術,可在原(yuan)位(wei)研究細(xi)胞合(he)成某種多肽或蛋白質的(de)基因表達(da)。
此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
原位雜交:
原位(wei)雜(za)交(jiao)是指用(yong)特定探(tan)針定位(wei)、檢(jian)測DNA、RNA的(de)(de)一種有效的(de)(de)實驗方(fang)法,通(tong)過把特點序列客隆到特殊(shu)載(zai)體上(shang),通(tong)過轉錄酶反(fan)轉一條天然的(de)(de)RNA探(tan)針,將探(tan)針和切片樣品進(jin)行雜(za)交(jiao),通(tong)過一系列顯色(se)方(fang)法,來確定RNA或(huo)者(zhe)DNA表達區域;本中心原位(wei)雜(za)交(jiao)探(tan)針采用(yong)的(de)(de)是第高辛和生物(wu)素(su)標記,靈敏(min)度(du)和同位(wei)素(su)相(xiang)當。 我們采用(yong)roche標記及顯色(se)試(shi)劑盒,GISH/ISH/FISH按照(zhao)探(tan)針進(jin)行收(shou)費(fei),每(mei)(mei)個試(shi)劑盒每(mei)(mei)條探(tan)針可以雜(za)交(jiao)60-80張玻片,收(shou)費(fei)為1萬5千(qian)元(yuan)(yuan),GISH雜(za)交(jiao)因需要加(jia)抗(kang)淬(cui)滅劑每(mei)(mei)條探(tan)針收(shou)費(fei)為1萬9千(qian)元(yuan)(yuan)。量大優惠!
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