20世紀80年代的DNA原位雜交開啟了分子病理檢測的大門，隨后相繼出現了在組織切片上的原位雜交，目的是檢測肝1炎和肝1癌組織中的乙1肝1病毒。之后，越來越多的腫1瘤相關基因被發現，一批用于檢測靶向治1療藥1物靶點的分子病理技術迅速問世，如FISH檢測乳1腺癌HER2基因擴增、ARMS法檢測肺1癌1基因突變等。

水(shui)(shui)稻(dao)種子(zi)(zi)(zi)是人(ren)類重要(yao)的食物(wu)來(lai)源，其(qi)發(fa)育(yu)涉及一個復雜的調(diao)控(kong)(kong)網絡(luo)，其(qi)中轉錄(lu)(lu)因(yin)子(zi)(zi)(zi)發(fa)揮了關鍵作用。MADS轉錄(lu)(lu)因(yin)子(zi)(zi)(zi)家(jia)族(zu)成(cheng)員是植物(wu)花(hua)器1官發(fa)育(yu)的重要(yao)調(diao)控(kong)(kong)因(yin)子(zi)(zi)(zi)，已有(you)的研究(jiu)表明，植物(wu)原(yuan)位雜交檢測(ce)服務(wu)，幾乎所有(you)的水(shui)(shui)稻(dao)MADS基因(yin)都在種子(zi)(zi)(zi)中表達(da)，但對MADS家(jia)族(zu)成(cheng)員參(can)與水(shui)(shui)稻(dao)種子(zi)(zi)(zi)發(fa)育(yu)調(diao)控(kong)(kong)的研究(jiu)結果(guo)仍比較少。

在這項研究中(zhong)，研究組(zu)基(ji)于(yu)前(qian)期的(de)(de)(de)(de)(de)表(biao)達(da)譜(pu)(pu)研究基(ji)礎，分(fen)析得到了(le)一個(ge)在水稻生殖發育(yu)(yu)階段優先表(biao)達(da)的(de)(de)(de)(de)(de)轉錄因子MADS29。細致分(fen)析表(biao)明，MADS29在花藥、胚(pei)珠(zhu)和種子中(zhong)均(jun)表(biao)達(da)，且(qie)在受精后的(de)(de)(de)(de)(de)母(mu)體組(zu)織表(biao)達(da)量高。MADS29的(de)(de)(de)(de)(de)反義(yi)轉1基(ji)因植(zhi)株呈現(xian)種子皺縮、淀粉粒形(xing)態異(yi)常(chang)、灌漿速率下降(jiang)等(deng)表(biao)型。通(tong)過(guo)解剖學切片、末端轉移酶(mei)標(biao)記(ji)實驗和全基(ji)因組(zu)表(biao)達(da)譜(pu)(pu)芯片分(fen)析等(deng)，研究人員證明了(le)MADS29通(tong)過(guo)調控(kong)(kong)程序化死1亡(wang)(PCD)過(guo)程促進(jin)珠(zhu)心細胞(bao)和珠(zhu)心突(tu)起處的(de)(de)(de)(de)(de)降(jiang)解。進(jin)一步(bu)的(de)(de)(de)(de)(de)體外凝膠阻(zu)滯(zhi)實驗顯(xian)示(shi)，MADS29能夠通(tong)過(guo)直接結合(he)程序化死1亡(wang)相關基(ji)因的(de)(de)(de)(de)(de)啟動子區(qu)域而(er)調控(kong)(kong)其表(biao)達(da)，進(jin)而(er)影響(xiang)胚(pei)乳發育(yu)(yu)。

原位雜交第三天

1） 用1ml含10%熱滅清的(de)MABT溶液置(zhi)換(huan)溶液，放置(zhi)搖床上(shang)25分(fen)鐘，然(ran)后(hou)用1mlMABT置(zhi)換(huan)，25分(fen)鐘，再用1mlMABT溶液置(zhi)換(huan)，一小時(shi)以上(shang)，后(hou)用1mlMABT溶液置(zhi)換(huan)，25分(fen)鐘。

2） 用1ml 1mM左旋米睉(cuo)的Staining buffer洗三次，每次放置(zhi)五分(fen)鐘。

3）將胚胎轉入十六孔(kong)板(ban)(ban)中，吸去(qu)staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM左旋米唑），十六孔(kong)板(ban)(ban)外面包(bao)上錫(xi)箔紙以(yi)避光，避免搖(yao)動(dong)，室(shi)溫(wen)下顯色。

4）每隔(ge)一小(xiao)時觀(guan)察胚胎是(shi)否開始顯(xian)色

5）將顯色完全(quan)的(de)胚胎中的(de)底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。

6）4C冰箱保存。

武漢科銳諾生物(多圖)-植物原位雜交檢測服務由武漢科銳諾生物科技有限公司提供。武漢科銳諾生物科技有限公司為客戶提供“外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術服務”等業務，公司擁有“科銳諾”等品牌，專注于技術合作等行業。，在湖北省武漢市江夏區神墩四路666號武漢國英種子A棟1樓的名聲不錯。歡迎來電垂詢，聯系人：王經理。