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將32 P標(biao)記的雙鏈(lian)DNA探(tan)針(zhen)(zhen)于100℃加(jia)熱(re)5分鐘,迅(xun)速置于冰浴中。單鏈(lian)探(tan)針(zhen)(zhen)不(bu)必變性。將探(tan)針(zhen)(zhen)加(jia)到(dao)雜(za)交袋中雜(za)交過夜。雜(za)交期間,盛(sheng)濾膜的容器應蓋嚴,以防液體(ti)蒸發。
雜(za)交結束后,原位(wei)雜(za)交技術咨詢(xun),去除(chu)雜(za)交液(ye),立(li)即于室(shi)溫(wen)把濾(lv)膜放入(ru)大體積(ji)(300-500ml)的(de)2×SSC和0.1% SDS溶液(ye)中,輕輕振搖5分鐘,并將濾(lv)膜至少翻轉一次。重復洗 一次,同時應避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
植物原位雜交在遺傳育(yu)種方(fang)面的應(ying)用(yong)主要包括:
檢測物種(zhong)或品種(zhong)特(te)異性:通過植(zhi)物原位(wei)雜交技術可以檢測出不(bu)同物種(zhong)或品種(zhong)之(zhi)間基因(yin)表(biao)達的差異,原位(wei)雜交,從而為物種(zhong)或品種(zhong)特(te)異性研究提(ti)供依據。
遺傳育種:通過植物原位雜交技術可以檢測到不同品種之間基因表達的差異,原位雜交檢測,從而為遺傳育種提供重要的參考信息。例如,通過將特定的外源基因導入到植物細胞中,原位雜交技術服務,然后利用原位雜交技術檢測該基因在植物細胞中的位置和表達情況,為遺傳育種提供重要的參考信息。
植(zhi)(zhi)物染(ran)色體(ti)原位(wei)雜交是一種重要的(de)分子(zi)生物學技術,它可以用(yong)來(lai)研(yan)究植(zhi)(zhi)物基因組的(de)結構和功(gong)能(neng)。該技術利用(yong)DNA探針與目標DNA序(xu)列的(de)互(hu)補性(xing)結合,通過熒光或性(xing)標記來(lai)檢(jian)測(ce)目標DNA序(xu)列在(zai)染(ran)色體(ti)上的(de)位(wei)置和數量。
植物染(ran)(ran)色(se)體(ti)原位雜(za)交技術(shu)的基本原理是(shi)將DNA探針標(biao)(biao)記(ji)上熒光或性同位素(su),然后(hou)將其與目(mu)標(biao)(biao)DNA序列(lie)(lie)進行雜(za)交。在雜(za)交過程(cheng)中,探針與目(mu)標(biao)(biao)DNA序列(lie)(lie)互(hu)補結(jie)合(he),形成穩定的雙鏈DNA分子。隨后(hou),通過熒光或性同位素(su)探測技術(shu),可以檢(jian)測到目(mu)標(biao)(biao)DNA序列(lie)(lie)在染(ran)(ran)色(se)體(ti)上的位置和數量。
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