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植(zhi)物組(zu)織原位雜交(jiao)(jiao)技術在植(zhi)物基因表(biao)達和調控(kong)研(yan)究(jiu)中具(ju)有廣泛(fan)的(de)(de)應用。它可(ke)(ke)以用來研(yan)究(jiu)植(zhi)物發育、生長、逆(ni)境響應等(deng)方面的(de)(de)基因表(biao)達模式和調控(kong)機制。例如,可(ke)(ke)以利用該技術研(yan)究(jiu)植(zhi)物中的(de)(de)轉錄因子(zi)、信號轉導(dao)通路、代謝(xie)途徑等(deng)基因的(de)(de)表(biao)達和調控(kong)。此外,植(zhi)物組(zu)織原位雜交(jiao)(jiao)技術還(huan)可(ke)(ke)以用來鑒(jian)定植(zhi)物中的(de)(de)病(bing)原體、檢測植(zhi)物等(deng)方面。
總之植物(wu)組織(zhi)原(yuan)位雜交技術是一種重要的(de)分子生(sheng)物(wu)學技術,可以用來(lai)研(yan)究植物(wu)基因的(de)表達和調控。它具有操作簡便、結果可靠、應用廣(guang)泛等優點,是植物(wu)分子生(sheng)物(wu)學研(yan)究中不可或缺(que)的(de)工具。
菌(jun)落(luo)的裂解及DNA結合于纖維素濾(lv)膜
(1) 在(zai)一張保(bao)鮮(xian)膜上(shang)制(zhi)作一個(ge)裝(zhuang)有0.5mol/L NaOH的小(xiao)洼(wa)(wa)(0.75ml),使(shi)菌落面朝上(shang),將濾膜放到小(xiao)洼(wa)(wa)上(shang),展平保(bao)鮮(xian)膜,使(shi)濾膜均勻濕潤(run),讓濾膜留于原處2-3分鐘。
(2) 用干紙巾從濾膜(mo)的下方吸(xi)干濾膜(mo),用一張新的保鮮膜(mo)和新配制的0.5mol/L NaOH重復步(bu)驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉移到新的(de)帶(dai)有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的(de)保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一(yi)次該(gai)步驟。
(4) 吸(xi)干濾(lv)(lv)膜,把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的保鮮膜小洼上(shang)5分鐘后吸(xi)干濾(lv)(lv)膜,轉移到一(yi)張干的濾(lv)(lv)紙上(shang),置于室溫20-30分鐘,使濾(lv)(lv)膜干燥。
(5) 將(jiang)濾膜夾在(zai)兩張干的濾紙(zhi)之間,熒光原位雜交,在(zai)真空烤(kao)箱中于80℃干烤(kao)2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
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