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將32 P標記的(de)雙鏈DNA探(tan)(tan)針于100℃加熱5分鐘(zhong),迅速置于冰浴中。單鏈探(tan)(tan)針不必變性。將探(tan)(tan)針加到雜交(jiao)(jiao)袋中雜交(jiao)(jiao)過夜。雜交(jiao)(jiao)期(qi)間,植物原位雜交(jiao)(jiao),盛(sheng)濾膜的(de)容器應蓋嚴,湖北原位雜交(jiao)(jiao),以防(fang)液體蒸(zheng)發。
雜(za)交結束后,去除雜(za)交液(ye),立即于室溫(wen)把濾膜(mo)放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液(ye)中,輕(qing)輕(qing)振搖5分鐘,并將(jiang)濾膜(mo)至少翻轉一(yi)次。重復洗 一(yi)次,同(tong)時(shi)應避免膜(mo)干涸(he)。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,原位雜交檢測,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
植物(wu)(wu)染色(se)體原(yuan)位(wei)雜(za)交是(shi)一種重要的(de)分子生物(wu)(wu)學技術(shu),它(ta)可(ke)以用來研究植物(wu)(wu)基因組的(de)結構和(he)功能(neng)。該(gai)技術(shu)利用DNA探針與(yu)目標(biao)(biao)DNA序列(lie)的(de)互補性結合(he),通過熒光或(huo)性標(biao)(biao)記來檢測目標(biao)(biao)DNA序列(lie)在染色(se)體上的(de)位(wei)置和(he)數量。
植物(wu)染色體原位(wei)(wei)雜(za)(za)交(jiao)技術(shu)的(de)基本原理是將DNA探(tan)針標記上熒光或性同(tong)位(wei)(wei)素(su),然后將其(qi)與(yu)目(mu)標DNA序(xu)列(lie)(lie)進行雜(za)(za)交(jiao)。在雜(za)(za)交(jiao)過(guo)程中(zhong),探(tan)針與(yu)目(mu)標DNA序(xu)列(lie)(lie)互補結合,形(xing)成(cheng)穩定的(de)雙鏈DNA分(fen)子。隨后,通(tong)過(guo)熒光或性同(tong)位(wei)(wei)素(su)探(tan)測(ce)(ce)技術(shu),可(ke)以(yi)檢測(ce)(ce)到目(mu)標DNA序(xu)列(lie)(lie)在染色體上的(de)位(wei)(wei)置和數量。
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