水稻(dao)種(zhong)(zhong)子(zi)(zi)是人(ren)類重要的食(shi)物(wu)來源，其發(fa)育(yu)涉及一個復雜的調控(kong)網絡，其中(zhong)轉(zhuan)錄因(yin)(yin)子(zi)(zi)發(fa)揮了關(guan)鍵作用。MADS轉(zhuan)錄因(yin)(yin)子(zi)(zi)家族(zu)(zu)成員(yuan)是植物(wu)花器1官(guan)發(fa)育(yu)的重要調控(kong)因(yin)(yin)子(zi)(zi)，已(yi)有(you)的研(yan)究表明，幾(ji)乎(hu)所有(you)的水稻(dao)MADS基(ji)因(yin)(yin)都在種(zhong)(zhong)子(zi)(zi)中(zhong)表達，但對MADS家族(zu)(zu)成員(yuan)參與水稻(dao)種(zhong)(zhong)子(zi)(zi)發(fa)育(yu)調控(kong)的研(yan)究結果(guo)仍比較(jiao)少。

在(zai)這項(xiang)研究中，研究組(zu)基于前期的(de)(de)(de)表(biao)(biao)(biao)達(da)譜(pu)(pu)研究基礎，分(fen)(fen)析得到了(le)一個(ge)在(zai)水稻生殖發育(yu)階段優先(xian)表(biao)(biao)(biao)達(da)的(de)(de)(de)轉錄(lu)因子MADS29。細致(zhi)分(fen)(fen)析表(biao)(biao)(biao)明，MADS29在(zai)花藥、胚珠(zhu)和種子中均表(biao)(biao)(biao)達(da)，且在(zai)受精后的(de)(de)(de)母體(ti)組(zu)織表(biao)(biao)(biao)達(da)量(liang)高。MADS29的(de)(de)(de)反義轉1基因植株呈現種子皺(zhou)縮、淀(dian)粉粒形態異常(chang)、灌(guan)漿速率(lv)下(xia)降等(deng)表(biao)(biao)(biao)型。通(tong)過(guo)解(jie)剖學切片、末(mo)端轉移(yi)酶標記實(shi)驗和全基因組(zu)表(biao)(biao)(biao)達(da)譜(pu)(pu)芯片分(fen)(fen)析等(deng)，研究人員證(zheng)明了(le)MADS29通(tong)過(guo)調控程序化死(si)1亡(PCD)過(guo)程促(cu)進(jin)珠(zhu)心細胞和珠(zhu)心突起(qi)處的(de)(de)(de)降解(jie)。進(jin)一步的(de)(de)(de)體(ti)外凝膠阻滯(zhi)實(shi)驗顯示，MADS29能(neng)夠通(tong)過(guo)直接結合程序化死(si)1亡相關基因的(de)(de)(de)啟動(dong)子區(qu)域而調控其表(biao)(biao)(biao)達(da)，進(jin)而影響胚乳發育(yu)。

癌組織(zhi)原位雜交實驗步驟：

       1. 將準備(bei)做原位雜交(jiao)的樣本常(chang)規脫水、浸(jin)蠟(la)、包埋。切(qie)片(pian)厚度6-8μm。

       2. 玻片的(de)處理(li)：一般采用多(duo)聚賴氨(an)酸或APES。

       3. 石(shi)蠟(la)切(qie)片經常規脫蠟(la)至水。30%H2O2 1份+蒸(zheng)餾水10份混(hun)合，室溫(wen)5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸(zheng)餾水洗3次(ci)。

       4. 暴露(lu)mRNA核酸片段(duan)：切片上(shang)滴加(jia)3%檸檬(meng)(meng)酸新(xin)鮮(xian)稀釋的(de)胃(wei)蛋白酶(mei)（1ml 3% 檸檬(meng)(meng)酸加(jia)2滴濃縮(suo)型胃(wei)蛋白酶(mei)，混勻），37℃或室溫消化(hua)3--30分鐘(zhong)（視(shi)標本新(xin)舊、厚薄自行(xing)調整）。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘(zhong)。蒸餾水洗1次。

原位雜交雜交液注意事項：

       （1）雜交液內除含(han)一定濃度的(de)標記探針外，還含(han)有較高濃度的(de)鹽類、甲(jia)酰胺、硫酸葡聚(ju)糖、牛血1清(qing)白蛋白及(ji)載(zai)體DNA或RNA等。

       （2）雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)液(ye)(ye)中含有較(jiao)高(gao)(gao)(gao)濃度的Na+可(ke)使雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)率增加(jia)，可(ke)以(yi)減低探針(zhen)與組織(zhi)(zhi)標本(ben)之間的靜電結合(he)。甲(jia)酰胺(an)可(ke)使Tm降低，雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)液(ye)(ye)中含每1%的甲(jia)酰胺(an)可(ke)分別(bie)使RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)溫(wen)度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以(yi)雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)液(ye)(ye)中加(jia)入適量的甲(jia)酰胺(an)，可(ke)避免因雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)溫(wen)度過(guo)高(gao)(gao)(gao)而引(yin)起的組織(zhi)(zhi)形(xing)態(tai)結構的破壞以(yi)及標本(ben)的脫(tuo)落。硫酸葡聚(ju)糖能與水結合(he)，從而減少雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)液(ye)(ye)的有效容積，植物(wu)染色體原位(wei)雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)檢測服務，提(ti)(ti)高(gao)(gao)(gao)探針(zhen)有效濃度，以(yi)達到(dao)提(ti)(ti)高(gao)(gao)(gao)雜(za)(za)(za)交(jiao)(jiao)(jiao)率的目的（尤其對雙鏈核酸探針(zhen)）。

       在雜交液中加入牛血1清白蛋(dan)白及載體(ti)DNA或RNA等，都是(shi)為了(le)阻斷(duan)探針與組織結構成分之間的非特異性結合，以減(jian)低背景。