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分子病理技術服務-武漢科銳諾(圖)

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PCR技術是一種在生物體細胞外通過酶促合成特異DNA或DNA片段的方法。其原理是設計特異引物,在TaqDNA聚合酶催化作用下,分子病理技術服務,經過高溫變性、低溫退火和適溫延伸3個步驟反復循環,對某一特定模板的特定區域進行擴增,反應結束后應用凝膠電泳或測序等方法分析產物。因此,該技術可以直接檢測疾病組織、細胞中是否存在某種病毒DNA,同時PCR技術還是基因突變檢測的前期必備技術。

阻斷(duan)內源性(xing)過(guo)氧(yang)化物酶:滴加(jia)3%1甲1醇-H2O2,室溫避光孵育15min,將玻片(pian)置于PBS(PH7.4)中在(zai)脫色搖床上(shang)晃動(dong)洗滌3次,每次5min。

預雜交(jiao):滴(di)加(jia)預雜交(jiao)液,37°C孵育1h。

雜(za)(za)交:傾去預雜(za)(za)交液,滴加含探(tan)針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜(za)(za)交液,濃度6ng/ul,恒溫箱37度雜(za)(za)交過夜。

雜交(jiao)后洗(xi)(xi)滌:洗(xi)(xi)去雜交(jiao)液,2×SSC,37°C 洗(xi)(xi)10min,1×SSC,37°C洗(xi)(xi)2×5min,0.5×SSC室溫洗(xi)(xi)10min。若(ruo)非特異(yi)雜交(jiao)體較多(duo),可以增(zeng)加甲酰(xian)胺(an)洗(xi)(xi)滌。

滴加封(feng)閉液:滴加封(feng)閉血1清(qing)(正常(chang)兔血1清(qing)),室溫30min。

滴加鼠(shu)抗地1高辛標記(ji)過氧化物酶(anti-DIG-HRP):傾去封閉液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min,后(hou)PBS洗3次(ci)×5min。

        

原位雜交

實驗原理

原位雜交技術(in situhybridization)是以(yi)標記的核酸分(fen)子為(wei)探針,在組織細胞原位檢測特異核酸分(fen)子的技術。

使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交,再以自顯影或細胞化學方法對標記探針進行探測,從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

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