將32 P標記的雙(shuang)鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘，迅(xun)速置(zhi)于冰浴(yu)中(zhong)。單鏈探針不(bu)必變性。將探針加到雜交(jiao)袋中(zhong)雜交(jiao)過夜(ye)。雜交(jiao)期間，盛濾(lv)膜的容器應蓋嚴，以防液體(ti)蒸發。

雜交結束后，去除(chu)雜交液，立即(ji)于室溫把濾膜放入大體積（300-500ml）的2×SSC和0.1% SDS溶(rong)液中，輕(qing)輕(qing)振搖5分鐘，并將濾膜至少翻轉一(yi)次。重復洗 一(yi)次，同時(shi)應避免膜干涸(he)。

68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次，每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件，可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。

原位雜交雜交液

（一）雜交(jiao)液內除含一定濃(nong)度(du)的(de)標(biao)記探針外，還(huan)含有較高濃(nong)度(du)的(de)鹽類、甲(jia)酰胺、硫酸葡聚糖(tang)、牛白(bai)蛋白(bai)及(ji)載(zai)體(ti)DNA或RNA等(deng)。

（二(er)）雜(za)交液中(zhong)含有較(jiao)高(gao)濃度的Na+可(ke)(ke)使雜(za)交率增加，可(ke)(ke)以減低探針與組織標本之間的靜電結合。

（三(san)）賈(jia)酰胺(an)可(ke)使雜(za)交溫(wen)(wen)度(du)降低，動物(wu)組(zu)織原位(wei)雜(za)交，所以雜(za)交液中(zhong)加入適(shi)量的(de)甲酰胺(an)，可(ke)避免因雜(za)交溫(wen)(wen)度(du)過高而引起的(de)組(zu)織形態結(jie)構的(de)破壞以及(ji)標本的(de)脫落。

（四）硫酸葡聚糖能與(yu)水結(jie)合，從而減少雜交液的有(you)效容積，提高(gao)探針有(you)效濃度，以達到(dao)提高(gao)雜交率的目的。

原位(wei)雜(za)交的(de)基(ji)本原理是利用標記的(de)核(he)酸探(tan)針與細胞或(huo)組織(zhi)中的(de)DNA或(huo)RNA進(jin)行雜(za)交，然后(hou)通過檢(jian)測標記來識別探(tan)針的(de)位(wei)置(zhi)。這使(shi)得研究人員能夠在細胞或(huo)組織(zhi)中確定(ding)特定(ding)基(ji)因(yin)或(huo)基(ji)因(yin)組區域的(de)位(wei)置(zhi)和(he)表達水(shui)平。

原(yuan)位雜交(jiao)可(ke)以(yi)用于多(duo)種(zhong)類(lei)(lei)型(xing)的(de)實驗。例如，它可(ke)以(yi)用來檢(jian)測特(te)定基因(yin)在(zai)發育過程(cheng)中的(de)表達模(mo)式，或者確定特(te)定基因(yin)變異在(zai)細胞(bao)中的(de)分(fen)布(bu)。此外，原(yuan)位雜交(jiao)還可(ke)以(yi)用于診斷疾病，例如某(mou)些(xie)類(lei)(lei)型(xing)的(de)，以(yi)及監(jian)測效果。