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原(yuan)位雜交是(shi)一種(zhong)生(sheng)物學(xue)(xue)技術,它可以在(zai)細(xi)胞或(huo)組織中(zhong)特(te)(te)定部位檢測(ce)DNA或(huo)RNA的(de)(de)存在(zai),而不(bu)需要(yao)將DNA或(huo)RNA分離(li)出來。這(zhe)項(xiang)技術使用標記的(de)(de)DNA或(huo)RNA探針,原(yuan)位雜交檢測(ce),與(yu)細(xi)胞或(huo)組織中(zhong)的(de)(de)相應DNA或(huo)RNA進行特(te)(te)異(yi)性結合,然后通過光(guang)學(xue)(xue)顯微(wei)鏡(jing)或(huo)電子顯微(wei)鏡(jing)觀察探針的(de)(de)位置和(he)數(shu)量。
原位(wei)雜交的(de)(de)(de)原理很簡單。DNA或(huo)RNA分子具有互補的(de)(de)(de)核苷(gan)酸(suan)序列(lie),因此可以(yi)通過氫鍵相互結合。將標記的(de)(de)(de)DNA或(huo)RNA探針(zhen)與細(xi)胞中的(de)(de)(de)DNA或(huo)RNA進行雜交,可以(yi)特異(yi)性地檢測這些探針(zhen)的(de)(de)(de)位(wei)置和(he)數量(liang)。探針(zhen)的(de)(de)(de)數量(liang)和(he)位(wei)置可以(yi)反映DNA或(huo)RNA在細(xi)胞中的(de)(de)(de)水平和(he)分布。
怎樣保證原(yuan)位(wei)雜交實驗操(cao)作時(shi)的溫(wen)度(du)?
建議儀器操作,人工操作的話要注意:
(1)對熒(ying)光原位雜交操(cao)作過程(cheng)中(zhong)可(ke)能使用的一些儀(yi)器進行(xing)溫控檢查,不符合要求的進行(xing)更換。
(2)盡(jin)可能地(di)保持(chi)環境溫度在(zai)20度以上。
(3)針對(dui)需(xu)要預熱以達到要求溫度的試劑,在使用(yong)前必(bi)須使用(yong)溫度計(ji)對(dui)其進行測(ce)溫。
(4)同時檢測的樣本不超過4塊,操作一定要迅速,實驗人員要注意一些小部件的溫度,尤其是在冬季。
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