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花芽原位雜交測試服務-科銳諾(推薦商家)

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熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,花芽原位雜交測試服務,雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料[1,2].FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.

阻斷內源性過氧化物酶:滴加3%1甲1醇-H2O2,室(shi)溫避光孵育(yu)15min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗(xi)滌3次,每次5min。

預雜(za)交(jiao):滴加預雜(za)交(jiao)液,37°C孵(fu)育1h。

雜交(jiao):傾去預雜交(jiao)液,滴(di)加含探針(zhen)has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交(jiao)液,濃(nong)度6ng/ul,恒溫箱37度雜交(jiao)過夜。

雜交(jiao)后洗滌:洗去雜交(jiao)液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若(ruo)非特異雜交(jiao)體(ti)較(jiao)多,可以增加甲酰胺洗滌。

滴加封閉液(ye):滴加封閉血1清(正常兔血1清),室溫30min。

滴加鼠抗地(di)1高辛標(biao)記過氧化物酶(anti-DIG-HRP):傾(qing)去封閉液(ye),滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min,后PBS洗3次(ci)×5min。

        

意義

在研究DNA分子原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點,應用帶有標記的(有性同位素,如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

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