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免疫蛋白熒光定位-貝科新肽(推薦商家)

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GaMYB2 在洋蔥表皮細胞中的瞬時表達分析:采用基因轟擊的方法,用包裹質粒的金粉對洋蔥表皮進行轟擊,暗培養過夜后,在激光共聚焦顯微鏡下進行觀察,免疫蛋白熒光定位,從圖A 中可以看出對照GFP空載體在整個洋蔥細胞均能看到綠色熒光,為組成型表達;從圖B 中發現GaMYB2-GFP 的融合表達載體只能在細胞核中能看到綠色熒光,這進一步證明該蛋白不具有跨膜蛋白結構,定位在細胞核中,具有轉錄因子的一般特征。

直接法

將標記的(de)特異(yi)性熒光(guang),直接加在抗原標本上,經一定的(de)溫度(du)和時間的(de)染(ran)色,用水洗去未參加反應的(de)多(duo)余熒光(guang),室(shi)溫下干燥后(hou)封片、鏡檢。

間接法

如檢查未知抗原,先用已知未標記的特異()與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的,再用標記的抗(第二)與抗原標本反應,使之形成—抗原—復合物,再用水洗去未反應的標記,干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知,則表明抗原標本是已知的,待檢為,其它步驟的抗原檢查相同。

為什么有的基因(yin)定位結果與預想的不一致(zhi)?

對于一(yi)個特定的(de)定位(wei)載體,只要熒(ying)光表達較(jiao)好,其定位(wei)結(jie)果是確定的(de),不會(hui)隨(sui)人(ren)為意(yi)愿或操(cao)作而改(gai)變(bian)。至于有(you)時候(hou)和預想的(de)結(jie)果不一(yi)樣,可能和蛋(dan)白本身(shen)、選擇的(de)表達載體以及熒(ying)光蛋(dan)白融合方式等有(you)關(guan)。

為什么有(you)的普通定位(wei)結果出來后無法準確判斷(duan)其定位(wei)位(wei)置?

細胞中的細胞器復雜且多樣,除一些常見的、特征比較明顯的細胞器外,有些細胞器在激光共聚焦下形狀比較相似,例如:線粒體、過氧化物酶體、高爾基體等細胞器,它們的熒光表達形狀可能都是點狀,因此不易區分。這時可以結合基因的其他功能研究來判斷其可能表達的位置。另外,蛋白表達本身也是一個復雜的過程,涉及到多個合成場所及轉運過程,自身表達情況可能比較復雜,因此不易判斷具體的表達位置。

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