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原位雜(za)交是一項非常(chang)重(zhong)要(yao)的生物技術(shu),可(ke)以用于研究基因(yin)表達和(he)調控(kong),檢測基因(yin)變異(yi)和(he)染色體異(yi)常(chang),監測細(xi)胞生長(chang)和(he)凋(diao)亡,以及識別特定(ding)的細(xi)胞類型或組織。然而(er),它需要(yao)特殊的操作技術(shu)和(he)設備,以及嚴格的對照實驗才能(neng)獲得(de)可(ke)靠的結果。
原位雜交(jiao)(In situ hybridazation)
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收集斑馬魚的(de)(de)胚胎(tai),在Holfretor水(shui)中培養(yang),到(dao)達所需(xu)要(yao)的(de)(de)發育時(shi)期時(shi),用蛋白酶去除卵(luan)膜,用4%多(duo)聚甲醛固定(ding),在4℃保存(cun),染色體(ti)原位(wei)雜交,二十四小時(shi)后用50%2%多(duo)聚甲醛溶(rong)液洗,然后換成(cheng)(cheng),在-20C 保存(cun),待(dai)用(兩(liang)天(tian)和兩(liang)天(tian)以上的(de)(de)胚胎(tai)需(xu)要(yao)用處理,去除色素。或者使(shi)用苯锍(liu)脲稀溶(rong)液培養(yang),可阻斷色素的(de)(de)形(xing)成(cheng)(cheng))
將32 P標(biao)記的雙鏈DNA探針于100℃加(jia)熱5分鐘,迅速置于冰浴中(zhong)。單鏈探針不(bu)必變性。將探針加(jia)到雜交袋中(zhong)雜交過夜。雜交期間,盛(sheng)濾膜的容(rong)器應蓋嚴,以防液體蒸發。
雜交結(jie)束后,去除雜交液(ye),立即于室溫把濾(lv)膜(mo)放(fang)入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液(ye)中,輕輕振搖(yao)5分鐘,并將濾(lv)膜(mo)至(zhi)少翻轉一次(ci)。重復(fu)洗(xi) 一次(ci),同時(shi)應避免膜(mo)干(gan)涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
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