分子病理技術服務-科銳諾生物科技

||| 產品編號：591875204 更新時間：2025-02-09

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原位雜交雜交液注(zhu)意事項：

（1）雜(za)交(jiao)液內除含一定(ding)濃(nong)度的(de)(de)標記探針外，還含有較高(gao)濃(nong)度的(de)(de)鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚(ju)糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。

（2）雜(za)交(jiao)液(ye)中含(han)有較高(gao)濃度的(de)(de)(de)Na+可(ke)使(shi)雜(za)交(jiao)率增加，可(ke)以(yi)(yi)減低(di)探針(zhen)與組織(zhi)標(biao)本(ben)之(zhi)間的(de)(de)(de)靜電結合。甲酰(xian)胺可(ke)使(shi)Tm降低(di)，雜(za)交(jiao)液(ye)中含(han)每1%的(de)(de)(de)甲酰(xian)胺可(ke)分別使(shi)RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的(de)(de)(de)雜(za)交(jiao)溫(wen)度降低(di)0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以(yi)(yi)雜(za)交(jiao)液(ye)中加入適量的(de)(de)(de)甲酰(xian)胺，可(ke)避免因雜(za)交(jiao)溫(wen)度過(guo)高(gao)而(er)引(yin)起的(de)(de)(de)組織(zhi)形(xing)態結構的(de)(de)(de)破壞以(yi)(yi)及標(biao)本(ben)的(de)(de)(de)脫(tuo)落。硫酸(suan)葡聚糖能與水結合，從而(er)減少雜(za)交(jiao)液(ye)的(de)(de)(de)有效容積，提高(gao)探針(zhen)有效濃度，以(yi)(yi)達(da)到提高(gao)雜(za)交(jiao)率的(de)(de)(de)目(mu)的(de)(de)(de)（尤其對雙鏈核酸(suan)探針(zhen)）。

在雜交液中加入牛血1清白蛋(dan)白及載(zai)體DNA或RNA等，分子病(bing)理技術服務，都是為了(le)阻(zu)斷探針與組織結構成分之間的非特異性結合，以減低背(bei)景。

將少數菌落(luo)轉移到(dao)纖維素(su)濾膜上

（1）在含有選擇性的瓊脂平板(ban)上放一張纖維素(su)濾膜。

（2）用無菌牙簽將各個(ge)菌落先轉移至(zhi)濾膜(mo)上(shang)，再轉移至(zhi)含有(you)選擇(ze)性但未放濾膜(mo)的瓊脂主平(ping)(ping)板(ban)上(shang)。應(ying)按一(yi)(yi)定(ding)的格(ge)子(zi)進行(xing)劃(hua)線接種（或(huo)打(da)點）。每菌落應(ying)分別(bie)劃(hua)線于(yu)兩個(ge)平(ping)(ping)板(ban)的相同位(wei)置上(shang)。后(hou)，在濾膜(mo)和主平(ping)(ping)板(ban)上(shang)同時(shi)劃(hua)一(yi)(yi)個(ge)含有(you)非重組(zu)質粒的菌落。

（3）倒置平板，于37℃培養至劃線的細菌(jun)菌(jun)落生長到0.5-1.0mm的寬度(du)。

（4）用已(yi)裝(zhuang)防(fang)水(shui)黑色繪圖(tu)墨水(shui)的針頭穿透濾(lv)膜直(zhi)至瓊脂(zhi)，在3個以上(shang)的不對稱位(wei)置(zhi)作(zuo)標記。在主平板大(da)致相同的位(wei)置(zhi)上(shang)也(ye)作(zuo)上(shang)標記。

（5）用Parafilm膜封好主(zhu)平板，倒置貯(zhu)放于4℃，直至獲得雜交反應(ying)的結果。

（6）裂解細菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。

目前，我國已穩定開展的分子病理技術主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測序技術DNA原位雜交主要用于基因定位、特異基因(如病原微生物基因)檢測等;RNA原位雜交則用于基因表達檢測。原位雜交技術的優點是操作簡單，可直接定位組織，價格低廉，信號穩定，儲存方便，可做組織學評價，是目前應用較多的分子病理技術之一。

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