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原位雜交雜交液
(一)雜交(jiao)液內除(chu)含一定濃度(du)的(de)標記探針(zhen)外,還含有較高濃度(du)的(de)鹽類、甲酰(xian)胺、硫酸葡(pu)聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。
(二)雜(za)交液(ye)中(zhong)含有(you)較高(gao)濃度(du)的Na+可使(shi)雜(za)交率增加(jia),可以減低探針與(yu)組織(zhi)標本(ben)之間的靜電結合(he)。
(三(san))賈酰胺可(ke)使雜(za)交溫(wen)度(du)(du)降低,所(suo)以雜(za)交液中加入適量的甲酰胺,可(ke)避免因雜(za)交溫(wen)度(du)(du)過(guo)高而引起(qi)的組(zu)織形態結構的破壞以及標本(ben)的脫落。
(四)硫酸葡(pu)聚(ju)糖能(neng)與(yu)水結合,從而減(jian)少雜交(jiao)液的(de)有效容積(ji),提(ti)高探針有效濃度,以(yi)達到提(ti)高雜交(jiao)率的(de)目的(de)。
原位雜交技(ji)術在許多領(ling)域都(dou)有應用,以(yi)下(xia)是其中幾個具體應用:
細胞(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)物學和發育生(sheng)(sheng)(sheng)物學:在(zai)細胞(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)物學和發育生(sheng)(sheng)(sheng)物學領(ling)域,原位雜交技(ji)術常被用(yong)于研究基(ji)(ji)因(yin)的(de)表達(da)和定位。例如(ru),通過標記特定基(ji)(ji)因(yin)的(de)探針,可以在(zai)細胞(bao)或組織中檢測特定基(ji)(ji)因(yin)序列的(de)存在(zai)和分布,進而(er)了解基(ji)(ji)因(yin)在(zai)細胞(bao)分化、發育和功(gong)能中的(de)作用(yong)。
基(ji)(ji)(ji)(ji)因組(zu)學和遺(yi)傳(chuan)學研究(jiu):原(yuan)位雜交技(ji)術也可(ke)用于基(ji)(ji)(ji)(ji)因組(zu)學和遺(yi)傳(chuan)學研究(jiu)。例(li)如,通過標記多個(ge)基(ji)(ji)(ji)(ji)因探針,可(ke)以檢(jian)測基(ji)(ji)(ji)(ji)因組(zu)中的多個(ge)基(ji)(ji)(ji)(ji)因序(xu)列,從(cong)而(er)進行基(ji)(ji)(ji)(ji)因定位、基(ji)(ji)(ji)(ji)因表達譜(pu)分析、基(ji)(ji)(ji)(ji)因突變檢(jian)測等(deng)研究(jiu)。
病(bing)毒(du)學和(he)(he)病(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)研究(jiu):在(zai)病(bing)毒(du)學和(he)(he)病(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)學領域,原位(wei)(wei)雜交(jiao)技術常被(bei)用(yong)于(yu)檢測和(he)(he)定位(wei)(wei)病(bing)毒(du)、細菌等病(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)。例如,通過(guo)標記(ji)特(te)異性或核(he)酸(suan)探針(zhen),熒光原位(wei)(wei)雜交(jiao),可(ke)以(yi)檢測組織中病(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)的存在(zai)、情況以(yi)及(ji)分布特(te)征(zheng),從而為疾病(bing)的預防、診斷和(he)(he)提供依據(ju)。
總之(zhi),原(yuan)位雜交技(ji)術在生(sheng)物學(xue)、醫(yi)學(xue)、基因組學(xue)、遺傳學(xue)、病(bing)毒學(xue)和病(bing)原(yuan)微生(sheng)物學(xue)等領域(yu)都有(you)廣泛的應用(yong)價值,為人類認識生(sheng)命現象、探究(jiu)疾病(bing)機制和提供(gong)了有(you)力的技(ji)術支(zhi)持。
在原位(wei)雜交過(guo)程中,需要使用標記的(de)(de)核酸(suan)探(tan)針,通(tong)常是在性核素或(huo)(huo)非性物(wu)質中標記的(de)(de)。這些(xie)探(tan)針可以通(tong)過(guo)不同的(de)(de)方式制備,例如從已知序(xu)列的(de)(de)DNA或(huo)(huo)RNA制備,或(huo)(huo)者通(tong)過(guo)使用生物(wu)信息學方法設(she)計和合成新的(de)(de)探(tan)針。
在進行(xing)原位(wei)雜(za)交時,細胞或組(zu)織需(xu)要固定(ding)在適當的(de)(de)支持物上,例如載玻(bo)片。然后,探(tan)針(zhen)與(yu)細胞或組(zu)織中的(de)(de)DNA或RNA進行(xing)雜(za)交,通常是(shi)在加熱(re)條件下(xia)進行(xing)的(de)(de)。接下(xia)來,通過洗(xi)滌和顯影(ying)步驟去除未結合的(de)(de)探(tan)針(zhen)和信號增強劑,后用顯微鏡觀察雜(za)交信號的(de)(de)位(wei)置。
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