外(wai)泌(mi)(mi)體(ti)研究(jiu)開展(zhan)的(de)(de)如(ru)(ru)(ru)火如(ru)(ru)(ru)荼。不(bu)論是(shi)(shi)(shi) SCI 文(wen)章的(de)(de)發表還是(shi)(shi)(shi)各(ge)類(lei)基1金(jin)的(de)(de)申請，外(wai)泌(mi)(mi)體(ti)相關研究(jiu)表現都非常亮眼。外(wai)泌(mi)(mi)體(ti)提取(qu)(qu)后，研究(jiu)人員(yuan)面臨的(de)(de)一個重(zhong)要問(wen)題(ti)就(jiu)是(shi)(shi)(shi)，我(wo)提取(qu)(qu)的(de)(de)是(shi)(shi)(shi)不(bu)是(shi)(shi)(shi)外(wai)泌(mi)(mi)體(ti)？如(ru)(ru)(ru)果是(shi)(shi)(shi)的(de)(de)話，質量如(ru)(ru)(ru)何？

現階段，對(dui)外(wai)(wai)泌體進(jin)行(xing)鑒定主要有三種(zhong)主流的(de)方法：電鏡、粒(li)徑和 Western blot 分(fen)析靶(ba)標(biao)物。之前我們已(yi)經對(dui)外(wai)(wai)泌體電鏡進(jin)行(xing)了總結，胞(bao)外(wai)(wai)囊泡粒(li)徑及濃度檢測，今(jin)天(tian)我們來看(kan)看(kan)外(wai)(wai)泌體的(de)粒(li)徑分(fen)析。

外泌體粒徑分析原理

外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle tracking Analysis， NT A)，其原理是對每個顆粒的布朗運動進行追1蹤和分析，結合 Stockes-Einstein 方程式計算出納米顆粒的流體力學直徑和濃度。NT A技術已被外泌體研究領域認可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式，NT A技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態、檢測速度更快。

外泌體的提取方式：

1、離心法：此種方法得到的外泌體量(liang)多，但是純度不足。

2、過濾離(li)心：這種操作簡單、省時，不影響外泌(mi)體的生物活性，但同樣(yang)純度不足。

3、密度(du)梯度(du)離(li)心法：用(yong)此(ci)種(zhong)方法分(fen)離(li)到的外(wai)泌體(ti)純度(du)較高，但是前期準(zhun)備工作繁雜

4、免1疫磁珠法：這種方法可(ke)以保證外(wai)泌(mi)體(ti)形態的完整，特異(yi)性高、操作(zuo)簡單，但生理(li)性鹽(yan)濃度(du)會(hui)影響外(wai)泌(mi)體(ti)生物活性。

5、色譜法：此種方法分離(li)出的外泌體大小均一(yi)，但設備特殊，應(ying)用不廣泛。

據國(guo)際(ji)細胞外囊泡學(xue)會（ISEV）在2014年(nian)的提議，外泌體(ti)鑒定3個標(biao)志：透射電(dian)鏡（transmission electron microscope，TEM）、粒徑(jing)（Nanoparticle Tracking Analysis， NTA）、蛋白標(biao)志物（Western Blot， WB）。

外(wai)泌(mi)體(ti)透(tou)射電鏡TEM鑒定外(wai)泌(mi)體(ti)大小、形(xing)態(tai)，判斷樣本(ben)是否含有外(wai)泌(mi)體(ti)。

外泌體(ti)透(tou)射電(dian)鏡分辨(bian)率(lv)為0.1~0.2nm，適合(he)外泌體(ti)雙(shuang)層囊膜超微結構觀察，可觀測樣本中是否存在外泌體(ti)樣結構（通常為茶托型或一側凹陷的半球形），同時可測量外泌體(ti)大(da)小。

檢測(ce)平臺：TecnaiTM G2 Spirit BioTWIN

檢測(ce)結果(guo)：三張透射(she)電鏡圖片，盡可能體現完整的外(wai)泌體形態（如有(you)）

檢測周期：10-15個工(gong)作(zuo)日(ri)