原位雜交

實驗原理

原(yuan)位雜交(jiao)技(ji)術(shu)（in situhybridization）是以標(biao)記的(de)核酸(suan)分子(zi)(zi)為探針，在組織(zhi)細胞原(yuan)位檢(jian)測(ce)特異核酸(suan)分子(zi)(zi)的(de)技(ji)術(shu)。

使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈即探針，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以自顯影或細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

染色體(ti)原(yuan)位雜交實驗的(de)基本(ben)原(yuan)理是利用特定標記的(de)已知堿基序列的(de)核酸探針(zhen)，依(yi)據堿基互(hu)補配對原(yuan)理，與中(zhong)期染色體(ti)玻片(pian)標本(ben)中(zhong)的(de)同(tong)源 DNA 序列進行雜交。

標(biao)記可(ke)以(yi)用(yong)放1射性同位素(su)(su)（3H、35S、32P），然后進行放1射自(zi)顯影；也可(ke)以(yi)用(yong)非放1射性的熒光素(su)(su)生物(wu)素(su)(su)、地1高(gao)辛(xin)，再用(yong)熒光顯微鏡進行觀察，即熒光原(yuan)位雜交(jiao)（fluorescent in situhybridization，FISH）技術(shu)。

   在酵(jiao)母(mu)雙雜交系統中，BD與X蛋(dan)白(bai)(bai)融合，AD與Y蛋(dan)白(bai)(bai)融合，植物葉片原位雜交技術服務(wu)，如果X、Y之(zhi)間形成蛋(dan)白(bai)(bai)-蛋(dan)白(bai)(bai)復(fu)合物，AD與BD會(hui)在空間上充(chong)分接(jie)近，重新構成結(jie)構域，啟(qi)動報告基(ji)因的(de)轉錄(lu)。擁(yong)有(you)(you)BD質(zhi)粒(li)的(de)酵(jiao)母(mu)可以(yi)在某一(yi)缺(que)陷(xian)培養基(ji)上生(sheng)(sheng)長，擁(yong)有(you)(you)AD質(zhi)粒(li)的(de)酵(jiao)母(mu)菌可以(yi)在另一(yi)種缺(que)陷(xian)培養基(ji)上生(sheng)(sheng)長，通過接(jie)合（mating）或共轉化(hua)使(shi)酵(jiao)母(mu)同時擁(yong)有(you)(you)AD與BD質(zhi)粒(li)。如果BD上的(de)目的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)與AD上的(de)誘餌蛋(dan)白(bai)(bai)存在相互作用，這樣的(de)酵(jiao)母(mu)可以(yi)在三缺(que)及四(si)缺(que)的(de)培養基(ji)上生(sheng)(sheng)長，并啟(qi)動β-半乳糖苷(gan)酶基(ji)因的(de)轉錄(lu)。