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先生: |
原位雜交第二天
1.
1)將探(tan)針回收,放于-20C保存(通常探(tan)針可重復(fu)使用十次左右(you))。
2)加入50%甲(jia)酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復一(yi)次。
3)置(zhi)換(huan)2XSSCT1ml,60℃,放置(zhi)15分鐘(zhong)。
4)置換0.2XSSCT1ml,原位(wei)雜交,60℃,放置30分鐘,重復一(yi)次(ci)。
2.
1)用MABT洗兩次(ci)(ci),每次(ci)(ci)五分鐘(zhong),放在搖床輕輕搖動(dong)。
2)室溫下加(jia)1ml 1:2:7溶液,染色體熒光原位雜交,時間為(wei)一小(xiao)時。
3)按1:3000的(de)比例在(zai)1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。
預雜交
1)每(mei)個(ge)管(guan)中(zhong)置(zhi)換成大(da)約(yue)300ulHYB-溶(rong)液,60℃水浴5分(fen)鐘,植物原位(wei)雜(za)交,避免(mian)振蕩(dang)。
2)用等體積(ji)的(de)HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,預雜交4小(xiao)時以上。
雜交
1)吸去預雜(za)交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..
2)60℃ 溫浴過夜。
注:雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結合越好,溫度越高,背景越小。
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