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原(yuan)位(wei)雜交技術(in situhybridization)是以(yi)標記的(de)(de)核酸(suan)分(fen)子為探(tan)針(zhen),在組(zu)織細(xi)(xi)胞(bao)(bao)原(yuan)位(wei)檢(jian)測(ce)特異(yi)(yi)核酸(suan)分(fen)子的(de)(de)技術。使含有特異(yi)(yi)序列(lie)、經過標記的(de)(de)核酸(suan)單(dan)鏈即探(tan)針(zhen),在適宜(yi)條件下與組(zu)織細(xi)(xi)胞(bao)(bao)中的(de)(de)互補核酸(suan)單(dan)鏈即靶核酸(suan)發生雜交,再以(yi)自顯(xian)影或(huo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)化學(xue)方法對標記探(tan)針(zhen)進行探(tan)測(ce),從而(er)在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)原(yuan)位(wei)顯(xian)示特異(yi)(yi)的(de)(de)DNA或(huo)RNA分(fen)子。
可以檢測cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各種種屬的標本,包括哺乳動物、爬行動物、菌、植物標本。也可以檢測組織芯片。
DNA 探(tan)針為原位(wei)雜交提供較(jiao)高(gao)的(de)靈敏度(du)。與RNA探(tan)針相比(bi),DNA探(tan)針與靶mRNA 分子的(de)雜交強度(du)較(jiao)弱,因此在雜交后(hou)的(de)洗滌中(zhong)不應使用(yong)甲醛(quan)。
探針特異性至關重要。如果已知細胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列,則可據此設計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補,那么探針只能與靶序列發生輕度雜交。這意味著,探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去,可能無法正確檢測。
原位雜交技術還在以下生物領域有應用(yong):
生態學(xue)(xue)和(he)環境(jing)科(ke)學(xue)(xue):在生態學(xue)(xue)和(he)環境(jing)科(ke)學(xue)(xue)領域(yu),原位(wei)雜(za)交技術(shu)可以用(yong)于(yu)研(yan)究生物與(yu)環境(jing)之間的(de)相互作用(yong)。例(li)如(ru),通過標記(ji)特定(ding)基因(yin)的(de)探針,動物組織原位(wei)雜(za)交,可以檢測環境(jing)中微生物種群的(de)分布和(he)變化,進而研(yan)究其(qi)對環境(jing)的(de)影響和(he)作用(yong)。
進化生物學:在進化生物學領域,原位雜交技術可以用于研究物種之間的遺傳差異和進化關系。例如,通過比較不同物種之間基因序列的差異,可以揭示物種之間的親緣關系和進化歷程。
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