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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位(wei)雜交,亞細胞定位(wei),蛋白(bai)互(hu)作(zuo),啟動子篩(shai)選(xuan)
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原位雜交第三天
1） 用1ml含(han)10％熱滅清的MABT溶液(ye)(ye)置(zhi)換溶液(ye)(ye)，放置(zhi)搖床上(shang)25分(fen)鐘(zhong)，然后用1mlMABT置(zhi)換，25分(fen)鐘(zhong)，再用1mlMABT溶液(ye)(ye)置(zhi)換，熒光原(yuan)位雜(za)交，一(yi)小時以上(shang)，后用1mlMABT溶液(ye)(ye)置(zhi)換，25分(fen)鐘(zhong)。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三(san)次，每次放(fang)置五(wu)分鐘。
3）將胚胎轉入十(shi)六孔板中，吸去staining buffer，加(jia)上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用(yong)之前加(jia)5mM左(zuo)旋米唑(zuo))，十(shi)六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖(yao)動，室(shi)溫下顯(xian)色。
4）每隔一小(xiao)時觀察胚胎是否開(kai)始顯色
5）將顯色完(wan)全的胚胎中的底(di)物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多(duo)聚甲醛(quan)固(gu)定，拍照(zhao)。
6）4C冰箱保存。
原(yuan)(yuan)位雜交技術(shu)的(de)(de)定義和基(ji)(ji)本原(yuan)(yuan)理原(yuan)(yuan)位雜交技術(shu)是一種基(ji)(ji)于核(he)(he)酸(suan)分子雜交原(yuan)(yuan)理，將標(biao)(biao)記的(de)(de)核(he)(he)酸(suan)探針與(yu)生物組織或(huo)細(xi)胞(bao)(bao)中的(de)(de)DNA或(huo)RNA進(jin)行(xing)特異性結合(he)，從而(er)在細(xi)胞(bao)(bao)水平(ping)上檢(jian)測(ce)目標(biao)(biao)核(he)(he)酸(suan)序(xu)列分布的(de)(de)技術(shu)。原(yuan)(yuan)位雜交技術(shu)的(de)(de)基(ji)(ji)本原(yuan)(yuan)理是利用(yong)DNA或(huo)RNA的(de)(de)互補性，通(tong)過(guo)加熱或(huo)化學(xue)反(fan)應使探針與(yu)組織或(huo)細(xi)胞(bao)(bao)中的(de)(de)目標(biao)(biao)核(he)(he)酸(suan)序(xu)列形成雙鏈(lian)復合(he)物，進(jin)而(er)實現目標(biao)(biao)核(he)(he)酸(suan)序(xu)列的(de)(de)定位。
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結合，雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.
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第3年
