iTRAQ (isobarictags for relative and absolute quantitation，同位素標記相對和絕1對定量)是由AB SCIEX公司研發的一種體外同重同位素標記的相對與絕1對定量技術。該技術使用8種（或4種）不同的同位素試劑來同時標記和比較8種（或4種）不同的蛋白質樣品。這些試劑由3個不同的化學標簽組成：報告部分，肽反應部分和平衡部分。報告部分為客戶可按需選擇標記個數，肽反應基團將iTRAQ標簽與肽段的N-端基團和每個賴氨酸側鏈相連，胞胞外囊泡zetaview檢測，可標記所有酶解肽段，平衡部位可保證iTRAQ試劑標記的不同樣本的同一肽段具有相同的質荷比，因此改變任一iTRAQ試劑，不同同位素在標記同一多肽后在一級質譜檢測，分子量都完全相同。而在串聯質譜中，同重元素標記肽段平衡基團在二級質譜發生中性丟失。信號離子表現為不同質荷比的峰，因此，根據波峰的高度及面積，可以得到蛋白質的定量信息。

外(wai)泌(mi)體(ti)是指(zhi)包(bao)含了(le)復雜 RNA 和蛋(dan)白質的(de)小膜(mo)泡 (30-150nm)，現今，其特指(zhi)直徑在40-100nm的(de)盤狀囊泡。1983年，外(wai)泌(mi)體(ti)于綿羊網(wang)織紅細(xi)胞中被發(fa)現， 1987年Johnstone將(jiang)其命名為“exosome”。多(duo)種細(xi)胞在正常及病(bing)理狀態下均可(ke)分泌(mi)外(wai)泌(mi)體(ti)。其主要來源于細(xi)胞內溶酶體(ti)微粒內陷形成(cheng)的(de)多(duo)囊泡體(ti)，經多(duo)囊泡體(ti)外(wai)膜(mo)與細(xi)胞膜(mo)融(rong)合(he)后釋放到胞外(wai)基質中 。

所有培養的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳1汁中。 有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的精1確分子機制剛剛開始研究。 外泌體被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。

外(wai)泌(mi)體(ti)研究開展的(de)如(ru)火如(ru)荼。不(bu)論是(shi)(shi) SCI 文(wen)章的(de)發表(biao)還是(shi)(shi)各類基1金的(de)申請，外(wai)泌(mi)體(ti)相(xiang)關研究表(biao)現都非常亮眼。外(wai)泌(mi)體(ti)提取(qu)后，研究人員(yuan)面臨(lin)的(de)一個重要(yao)問題就是(shi)(shi)，我提取(qu)的(de)是(shi)(shi)不(bu)是(shi)(shi)外(wai)泌(mi)體(ti)？如(ru)果(guo)是(shi)(shi)的(de)話，質量(liang)如(ru)何？

現階段，對(dui)外(wai)(wai)泌(mi)體進(jin)行鑒定主(zhu)要有三種主(zhu)流的方(fang)法：電鏡(jing)、粒徑和 Western blot 分(fen)析靶標物。之前我們(men)已經對(dui)外(wai)(wai)泌(mi)體電鏡(jing)進(jin)行了總結，今天我們(men)來(lai)看看外(wai)(wai)泌(mi)體的粒徑分(fen)析。

外泌體粒徑分析原理

外泌體粒徑分析方法為納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle tracking Analysis， NT A)，其原理是對每個顆粒的布朗運動進行追1蹤和分析，結合 Stockes-Einstein 方程式計算出納米顆粒的流體力學直徑和濃度。NT A技術已被外泌體研究領域認可為外泌體表征手段之一。相較于其他表征方式，NT A技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態、檢測速度更快。

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