一. 原位雜交天

1. 重(zhong)新水化(hua)和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘(zhong)。

2） 置(zhi)換成30％的(de)PBST溶液，染色體原(yuan)位雜(za)交，放置(zhi)5分鐘(zhong)

3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一次

4） 置換成4％多聚(ju)甲醛的PBS溶液固定20分鐘

5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘(zhong)，室溫。

蛋白(bai)酶處(chu)理與后固定（本實驗(yan)不做(zuo)此步）

1） 用(yong)10ul/ml的蛋白(bai)(bai)酶K在室(shi)溫(wen)下(xia)處(chu)理胚胎(tai)。5體(ti)節以下(xia)的胚胎(tai)不處(chu)理，5體(ti)節到24小時(shi)的胚胎(tai)處(chu)理3分鐘，24小時(shi)以上的胚胎(tai)處(chu)理5分鐘或者更長(chang)。發育時(shi)間越短(duan)的胚胎(tai)越嫩(nen)，染色(se)體(ti)熒(ying)光原位雜(za)交，可以不用(yong)或者少用(yong)蛋白(bai)(bai)酶處(chu)理，發育時(shi)間長(chang)的胚胎(tai)就需要用(yong)蛋白(bai)(bai)酶來疏松組織，以便于雜(za)交。

2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置(zhi)5分鐘。

3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定(ding)20分鐘，室溫(wen)。

4） 用(yong)PBST洗兩次，每次放置(zhi)五分鐘，室溫。

原位雜交技術還(huan)在以(yi)下(xia)生物(wu)領域有(you)應(ying)用：

生態(tai)學(xue)(xue)和環(huan)境科學(xue)(xue)：在生態(tai)學(xue)(xue)和環(huan)境科學(xue)(xue)領域(yu)，原位雜(za)(za)交技術(shu)可以(yi)用(yong)于研究生物(wu)與環(huan)境之間的(de)相(xiang)互(hu)作用(yong)。例如(ru)，通過標記特定基因的(de)探針，可以(yi)檢測環(huan)境中微生物(wu)種群的(de)分布和變化，原位雜(za)(za)交，進(jin)而(er)研究其對(dui)環(huan)境的(de)影響和作用(yong)。

進化生物學：在進化生物學領域，原位雜交技術可以用于研究物種之間的遺傳差異和進化關系。例如，熒光原位雜交，通過比較不同物種之間基因序列的差異，可以揭示物種之間的親緣關系和進化歷程。

植物組織原位雜(za)交的步驟包括以(yi)下(xia)幾(ji)個方(fang)面：

1. 制備組(zu)織樣(yang)品：從植物(wu)中取出需(xu)要研究的組(zu)織樣(yang)品，如根(gen)、莖、葉等。

2. 固(gu)定組(zu)織樣(yang)(yang)品：將組(zu)織樣(yang)(yang)品固(gu)定在載玻片上，通常(chang)使用或乙醇等(deng)化學(xue)物(wu)質進(jin)行固(gu)定。

3. 處(chu)理組(zu)織(zhi)(zhi)樣品：對固(gu)定的組(zu)織(zhi)(zhi)樣品進(jin)行脫水、透明化、脫脂等處(chu)理，以便于DNA探針的穿透和結合。

4. 制備DNA探針：根據需要研究(jiu)的基因序列，設計并合成DNA探針。DNA探針可以標(biao)記熒光(guang)染料或性(xing)同位(wei)素(su)，以便于檢測。

5. 雜(za)交DNA探針：將(jiang)DNA探針與(yu)組(zu)織(zhi)樣品進(jin)行雜(za)交，通(tong)常需要在(zai)高溫下進(jin)行，以便于DNA探針與(yu)RNA或DNA結合。

6. 檢(jian)測雜交(jiao)信號：通過熒光顯(xian)微鏡或計數器等設備，檢(jian)測DNA探針與RNA或DNA的(de)結合情況，確定目標基因的(de)表達模式和位置(zhi)。