洋(yang)(yang)蔥(cong)亞細胞(bao)(bao)(bao)定(ding)位(wei) 如何(he)定(ding)位(wei)重(zhong)要(yao)細胞(bao)(bao)(bao)器 亞細胞(bao)(bao)(bao)定(ding)位(wei)辦(ban)(ban)法就(jiu)是(shi)用來肯定(ding)細胞(bao)(bao)(bao)內分子在(zai)細胞(bao)(bao)(bao)中的(de)位(wei)置(zhi)的(de)一種辦(ban)(ban)法。如何(he)使用熒光顯微鏡技術來定(ding)位(wei)洋(yang)(yang)蔥(cong)細胞(bao)(bao)(bao)中的(de)一些重(zhong)要(yao)細胞(bao)(bao)(bao)器。

植(zhi)物細(xi)胞(bao)(bao)是(shi)由許多不同的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)器(qi)組成的(de)(de)(de)，這些(xie)(xie)細(xi)胞(bao)(bao)器(qi)在細(xi)胞(bao)(bao)內扮演著不同的(de)(de)(de)角色。為了研究這些(xie)(xie)細(xi)胞(bao)(bao)器(qi)的(de)(de)(de)功能和(he)位置，蛋(dan)白互作，科學(xue)家們使用(yong)各種(zhong)技(ji)術來對它們進行定位。其中(zhong)一種(zhong)常用(yong)的(de)(de)(de)技(ji)術是(shi)熒光顯(xian)微鏡(jing)技(ji)術，它可以通(tong)過標記特定的(de)(de)(de)蛋(dan)白質或(huo)化(hua)合物來觀察它們在細(xi)胞(bao)(bao)內的(de)(de)(de)位置。

禾(he)谷(gu)菌 CgRab5A 的(de)亞細胞定位研究：劉涵等人利用多片(pian)段一(yi)步法將 CgRab5A 自(zi)身(shen)啟動子、GFP 片(pian)段和(he) CgRab5A 開(kai)放閱讀(du)框(kuang)（ORF）片(pian)段到 pKNT 載(zai)體上(shang)，轉化(hua)型禾(he)谷(gu)菌的(de)原(yuan)生(sheng)質體后(hou)，通(tong)過共聚(ju)焦顯微鏡觀察 GFP-CgRab5A 在(zai)菌絲和(he)孢子內(nei)(nei)的(de)定位情況。結果表明(ming)，GFP-CgRab5A 在(zai)菌絲和(he)孢子細胞內(nei)(nei)均(jun)呈點狀(zhuang)分布，定位于早期內(nei)(nei)涵體上(shang)。

水稻 OsUF 的亞細胞定位：丁作美等人通過得到水稻 E3 泛素連接酶 — 泛素融合蛋白（OsUF）基因的 cDNA 序列，并利用 Gateway 同源重組體系將 OsUF cDNA 全長重組到融合表達綠色熒光蛋白（GFP）的表達載體上，通過農桿菌介導的煙草瞬時表達系統進行亞細胞定位。結果顯示，OsUF 蛋白定位在細胞核。

為(wei)什么(me)不先對一個基因做預(yu)測，在(zai)預(yu)測的結(jie)果上直接(jie)做共(gong)定位？

不同(tong)的(de)(de)預(yu)測(ce)網(wang)站有不同(tong)的(de)(de)計算(suan)方法，同(tong)一個基(ji)因在不同(tong)的(de)(de)預(yu)測(ce)網(wang)站也可(ke)能得出(chu)不同(tong)的(de)(de)定(ding)(ding)(ding)(ding)位結果。另外所(suo)有的(de)(de)結果都應是基(ji)于實驗得到的(de)(de)，對于不清楚可(ke)能定(ding)(ding)(ding)(ding)位在哪里的(de)(de)基(ji)因，一般推(tui)薦先做普通(tong)(tong)定(ding)(ding)(ding)(ding)位，根據普通(tong)(tong)定(ding)(ding)(ding)(ding)位的(de)(de)結果再決定(ding)(ding)(ding)(ding)做哪種細胞器的(de)(de)共定(ding)(ding)(ding)(ding)位。

為什么有(you)的基因做原生質體轉化時熒光蛋白不亮？

不(bu)同物種的細胞可(ke)(ke)能對基因(yin)表達有影響，當在一種材(cai)料的原(yuan)生質(zhi)體(ti)中觀(guan)(guan)察不(bu)到熒光(guang)時，可(ke)(ke)以考(kao)慮換(huan)一種受(shou)體(ti)材(cai)料。另外(wai)，如(ru)果是分泌蛋白(bai)，在原(yuan)生質(zhi)體(ti)中無法觀(guan)(guan)察到熒光(guang)，此(ci)時可(ke)(ke)以考(kao)慮注射葉片(pian)來觀(guan)(guan)察熒光(guang)。

拍攝時為什么有明場通(tong)道？

（1）顯示細(xi)胞(bao)狀態，有活力(li)的原生質體細(xi)胞(bao)應該(gai)是飽(bao)滿圓(yuan)潤(run)的，變(bian)形或(huo)破碎的細(xi)胞(bao)說(shuo)明此時細(xi)胞(bao)不(bu)是適狀態或(huo)細(xi)胞(bao)已。

（2）顯示熒光確實是細胞內蛋白表達的，而不是細胞碎片及雜質產生的雜光。