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原位雜交(jiao)技術在許多(duo)領域都有應(ying)用(yong),以下是其(qi)中幾個具體應(ying)用(yong):
細(xi)胞(bao)生物學(xue)和發育生物學(xue):在(zai)細(xi)胞(bao)生物學(xue)和發育生物學(xue)領域,原位雜(za)交技術常(chang)被(bei)用于(yu)研究(jiu)基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)表(biao)達和定位。例(li)如(ru),通過標記(ji)特定基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)探針,熒光原位雜(za)交,可以在(zai)細(xi)胞(bao)或(huo)組織(zhi)中(zhong)檢測特定基(ji)(ji)因(yin)序列的(de)(de)存(cun)在(zai)和分布,進而了解基(ji)(ji)因(yin)在(zai)細(xi)胞(bao)分化、發育和功能(neng)中(zhong)的(de)(de)作用。
基(ji)(ji)因(yin)組(zu)學(xue)和(he)(he)遺傳學(xue)研究(jiu):原位雜交技術也可(ke)用于基(ji)(ji)因(yin)組(zu)學(xue)和(he)(he)遺傳學(xue)研究(jiu)。例如,通過標記多個基(ji)(ji)因(yin)探針,可(ke)以(yi)檢測基(ji)(ji)因(yin)組(zu)中(zhong)的多個基(ji)(ji)因(yin)序列,從而進行基(ji)(ji)因(yin)定位、基(ji)(ji)因(yin)表達譜(pu)分析、基(ji)(ji)因(yin)突變檢測等研究(jiu)。
病毒學和病原微生物(wu)研究:在(zai)病毒學和病原微生物(wu)學領域,原位(wei)(wei)雜交技術常被用于檢測和定(ding)位(wei)(wei)病毒、細菌等病原微生物(wu)。例如,通過標記特異性或核酸探針,可以檢測組織中病原微生物(wu)的存在(zai)、情況(kuang)以及分布特征,從而為疾(ji)病的預防、診斷(duan)和提(ti)供依據。
總之,原(yuan)(yuan)位雜(za)交技術(shu)在(zai)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)學(xue)、醫(yi)學(xue)、基因組學(xue)、遺(yi)傳學(xue)、病毒學(xue)和病原(yuan)(yuan)微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)學(xue)等領域都有廣(guang)泛的(de)應用價值,為人類認識生(sheng)(sheng)(sheng)命(ming)現象、探究疾病機制和提供了有力的(de)技術(shu)支(zhi)持。
菌(jun)落(luo)的裂解及DNA結合(he)于纖(xian)維素濾膜
(1) 在(zai)一(yi)張保(bao)鮮膜(mo)(mo)上(shang)制作(zuo)一(yi)個裝有(you)0.5mol/L NaOH的小洼(0.75ml),使菌落面朝上(shang),將濾(lv)膜(mo)(mo)放到小洼上(shang),展平(ping)保(bao)鮮膜(mo)(mo),植物(wu)原位雜交,使濾(lv)膜(mo)(mo)均勻濕潤,讓濾(lv)膜(mo)(mo)留于(yu)原處2-3分鐘(zhong)。
(2) 用(yong)干(gan)紙巾從濾(lv)膜的下方吸(xi)干(gan)濾(lv)膜,用(yong)一張新(xin)的保鮮膜和新(xin)配制的0.5mol/L NaOH重復步驟(1)。
(3) 吸干濾膜,將濾膜轉(zhuan)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4)的保鮮(xian)膜洼上。5分鐘后吸干濾膜,再重復一次(ci)該步(bu)驟。
(4) 吸干濾(lv)(lv)膜,把它(ta)轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4)的(de)保鮮(xian)膜小洼(wa)上5分(fen)鐘后吸干濾(lv)(lv)膜,轉移到一張干的(de)濾(lv)(lv)紙上,置于室溫20-30分(fen)鐘,使濾(lv)(lv)膜干燥。
(5) 將(jiang)濾膜(mo)夾在兩張干的濾紙之間,在真空(kong)烤箱中(zhong)于80℃干烤2小時,固定DNA。
(6) 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。
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