分子病理學在蛋白質和核酸等生物大分子水平上，應用分子生物學理論、技術及方法研究疾病發生L發展的過程，從而為傳統的病理學注入了生機。在如今的臨床病理診斷過程中，運用核酸原位雜交、PCR技術、免1疫熒光、免1疫組織化學染色等技術，能夠更加深化對疾病的本質認識，對于腫1瘤的診斷和治1療也有著臨床的指導意義。分子病理學診斷主要應用于以下幾個方面：1、對于腫1瘤易感基因的檢測，對于腫1瘤高危人群的篩檢具有實用價值，如檢測GSTπ基因以判定個體暴露于致癌物是的致癌危險性。2、腫1瘤相關病毒的檢測，如采用原位雜交方法檢測標本中HPV、EBER等病毒。

.雜交　（1） 盛有2×SSC的塑料盤同，將干烤的濾膜飄浮在液面上，浸濕5分鐘。（2） 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起，放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿，放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中，應緩緩搖動濾膜，防止它們粘在一起。（3） 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片，以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。（4） 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中，在適宜溫度（即在水溶液中雜交時用68℃，而在50%甲酰胺中雜交時用42℃）下，預雜交1-2小時。（5） 將32 P標記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘，迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間，盛濾膜的容器應蓋嚴，以防液體蒸發。

原位雜交天

1. 重新水(shui)化和固定

1） 吸取(qu)固定(ding)好(hao)的(de)胚胎，加(jia)入50%的(de)PBST溶(rong)液，放置5分鐘。

2） 置換成30%的(de)PBST溶液，放置5分鐘

3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，植(zhi)物組織原位雜(za)交檢(jian)測(ce)技(ji)術服務(wu)，重復(fu)一次

4） 置換成4%多聚甲(jia)醛的PBS溶液(ye)固定20分(fen)鐘5） 用PBST洗(xi)兩次，每次放(fang)置五(wu)分(fen)鐘，室溫(wen)。

蛋白(bai)酶處理與后固(gu)定（本實驗不做(zuo)此步）

1） 用10ul/ml的蛋(dan)(dan)白(bai)酶(mei)K在(zai)室溫下處(chu)理胚胎(tai)。5體(ti)(ti)節(jie)(jie)以下的胚胎(tai)不(bu)處(chu)理，5體(ti)(ti)節(jie)(jie)到24小時(shi)的胚胎(tai)處(chu)理3分鐘(zhong)，24小時(shi)以上的胚胎(tai)處(chu)理5分鐘(zhong)或(huo)者更長(chang)。發育(yu)時(shi)間(jian)越短的胚胎(tai)越嫩，可以不(bu)用或(huo)者少用蛋(dan)(dan)白(bai)酶(mei)處(chu)理，發育(yu)時(shi)間(jian)長(chang)的胚胎(tai)就需要(yao)用蛋(dan)(dan)白(bai)酶(mei)來疏松組織，以便于雜交(jiao)。

2） 用PBST溶液輕洗(xi)，在PBST中放置5分鐘。

3） 用4%多聚甲醛(quan)的PBS溶(rong)液(ye)固定20分鐘，室溫。

4） 用(yong)PBST洗兩次(ci)，每次(ci)放置五分鐘，室溫。

2. 預雜交

1）每個(ge)管中置換成大約300ulHYB－溶液，60℃水浴5分鐘(zhong)，避(bi)免振蕩。

2）用等(deng)體積(ji)的HYB+取代HYB－。

3）60℃水(shui)浴(yu)，預雜交(jiao)4小時以上(shang)。

3. 雜交

1）吸去預雜交的HYB+，加上100ul已加入探針(zhen)的HYB+溶(rong)液（探針(zhen)濃度約為(wei)1ng/ul）..

2）60℃ 溫(wen)(wen)浴過(guo)夜。注(zhu)：雜交與(yu)預雜交的溫(wen)(wen)度(du)可以是55到60度(du)不等，溫(wen)(wen)度(du)越低，探針結合越好，溫(wen)(wen)度(du)越高(gao)，背景(jing)越小。

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