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植物組織原位雜交檢測技術服務-科銳諾(圖)

||| 產品編號:594264719                    更新時間:2025-03-22
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分子病理學在蛋白質和核酸等生物大分子水平上,應用分子生物學理論、技術及方法研究疾病發生L發展的過程,從而為傳統的病理學注入了生機。在如今的臨床病理診斷過程中,運用核酸原位雜交、PCR技術、免1疫熒光、免1疫組織化學染色等技術,能夠更加深化對疾病的本質認識,對于腫1瘤的診斷和治1療也有著臨床的指導意義。分子病理學診斷主要應用于以下幾個方面:1、對于腫1瘤易感基因的檢測,對于腫1瘤高危人群的篩檢具有實用價值,如檢測GSTπ基因以判定個體暴露于致癌物是的致癌危險性。2、腫1瘤相關病毒的檢測,如采用原位雜交方法檢測標本中HPV、EBER等病毒。

.雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。(5) 將32 P標記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘,迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間,盛濾膜的容器應蓋嚴,以防液體蒸發。

原位雜交天

1. 重新水(shui)化和固定

1) 吸取(qu)固定(ding)好(hao)的(de)胚胎,加(jia)入50%的(de)PBST溶(rong)液,放置5分鐘。

2) 置換成30%的(de)PBST溶液,放置5分鐘

3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,植(zhi)物組織原位雜(za)交檢(jian)測(ce)技(ji)術服務(wu),重復(fu)一次

4) 置換成4%多聚甲(jia)醛的PBS溶液(ye)固定20分(fen)鐘5) 用PBST洗(xi)兩次,每次放(fang)置五(wu)分(fen)鐘,室溫(wen)。

蛋白(bai)酶處理與后固(gu)定(本實驗不做(zuo)此步)

1) 用10ul/ml的蛋(dan)(dan)白(bai)酶(mei)K在(zai)室溫下處(chu)理胚胎(tai)。5體(ti)(ti)節(jie)(jie)以下的胚胎(tai)不(bu)處(chu)理,5體(ti)(ti)節(jie)(jie)到24小時(shi)的胚胎(tai)處(chu)理3分鐘(zhong),24小時(shi)以上的胚胎(tai)處(chu)理5分鐘(zhong)或(huo)者更長(chang)。發育(yu)時(shi)間(jian)越短的胚胎(tai)越嫩,可以不(bu)用或(huo)者少用蛋(dan)(dan)白(bai)酶(mei)處(chu)理,發育(yu)時(shi)間(jian)長(chang)的胚胎(tai)就需要(yao)用蛋(dan)(dan)白(bai)酶(mei)來疏松組織,以便于雜交(jiao)。

2) 用PBST溶液輕洗(xi),在PBST中放置5分鐘。

3) 用4%多聚甲醛(quan)的PBS溶(rong)液(ye)固定20分鐘,室溫。

4) 用(yong)PBST洗兩次(ci),每次(ci)放置五分鐘,室溫。

2. 預雜交

1)每個(ge)管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘(zhong),避(bi)免振蕩。

2)用等(deng)體積(ji)的HYB+取代HYB-。

3)60℃水(shui)浴(yu),預雜交(jiao)4小時以上(shang)。

3. 雜交

1)吸去預雜交的HYB+,加上100ul已加入探針(zhen)的HYB+溶(rong)液(探針(zhen)濃度約為(wei)1ng/ul)..

2)60℃ 溫(wen)(wen)浴過(guo)夜。注(zhu):雜交與(yu)預雜交的溫(wen)(wen)度(du)可以是55到60度(du)不等,溫(wen)(wen)度(du)越低,探針結合越好,溫(wen)(wen)度(du)越高(gao),背景(jing)越小。

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