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核(he)酸(suan)原(yuan)位雜(za)交(jiao)可根(gen)據(ju)其檢(jian)測物而分為細胞內(nei)(nei)原(yuan)位雜(za)交(jiao)和(he)組(zu)織切(qie)片內(nei)(nei)原(yuan)位雜(za)交(jiao);根(gen)據(ju)其所(suo)用探(tan)針(zhen)及(ji)所(suo)要檢(jian)測核(he)酸(suan)的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜(za)交(jiao)。但不論哪種雜(za)交(jiao)都(dou)必須經過組(zu)織細胞的固定(ding),染色(se)體(ti)原(yuan)位雜(za)交(jiao),預(yu)雜(za)交(jiao),雜(za)交(jiao),沖等一系列洗步驟及(ji)自顯影(ying)或酶法顯色(se)以顯示雜(za)交(jiao)結果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,
原位(wei)(wei)雜(za)交(jiao)技術(shu)的定義和基本原理(li)原位(wei)(wei)雜(za)交(jiao)技術(shu)是一種基于核(he)酸(suan)(suan)(suan)分子雜(za)交(jiao)原理(li),將標(biao)(biao)記的核(he)酸(suan)(suan)(suan)探(tan)(tan)針(zhen)與生物組織或細(xi)胞中的DNA或RNA進行特(te)異(yi)性結合,從而在細(xi)胞水平(ping)上檢測目(mu)標(biao)(biao)核(he)酸(suan)(suan)(suan)序列分布的技術(shu)。原位(wei)(wei)雜(za)交(jiao)技術(shu)的基本原理(li)是利用DNA或RNA的互(hu)補性,通過加熱或化學(xue)反應使探(tan)(tan)針(zhen)與組織或細(xi)胞中的目(mu)標(biao)(biao)核(he)酸(suan)(suan)(suan)序列形成雙(shuang)鏈復合物,進而實現(xian)目(mu)標(biao)(biao)核(he)酸(suan)(suan)(suan)序列的定位(wei)(wei)。
把(ba)濾(lv)(lv)膜(mo)放在紙巾(jin)上于室溫晾干后,把(ba)濾(lv)(lv)膜(mo)(編號(hao)面朝上)放在一張保鮮(xian)膜(mo)上,并在保鮮(xian)膜(mo)上作幾個不對稱的標記(ji),以使濾(lv)(lv)膜(mo)與性自(zi)顯(xian)影片位置對應。
用(yong)第二張(zhang)保鮮(xian)膜(mo)蓋住濾膜(mo)。加光片并加上增感屏于-70℃曝(pu)光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標記。可從底片上取下透明紙,通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
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