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貝科新肽-染色體原位雜交

||| 產品編號:594565592                    更新時間:2025-03-25
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RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學或RNA原位雜交。該技術是指運用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細胞和組織內RNA表達的一種原位雜交技術。其基本原理是:在細胞或組織結構保持不變的條件下,用標記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細胞或組織中相應的基因片段相結合(雜交),所形成的雜交體(Hybrids)經顯色反應后在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細胞內相應的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術經不斷改進,其應用的領域已遠超出DNA原位雜交技術。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已成為有效的分子病理學技術,同時在分析低豐度和罕見的mRNA表達方面已展示了分子生物學的一重要方向。

雜交 (1) 盛有2×SSC的塑料盤同,將干烤的濾膜飄浮在液面上,浸濕5分鐘。(2) 將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。(3) 用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片,以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。(4) 將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中,染色體原位雜交,在適宜溫度(即在水溶液中雜交時用68℃,而在50%甲酰胺中雜交時用42℃)下,預雜交1-2小時。

在原(yuan)位雜(za)交(jiao)過程中,需要(yao)使用(yong)標(biao)記的(de)(de)核酸探針(zhen),通(tong)(tong)常是在性核素或(huo)非(fei)性物(wu)質中標(biao)記的(de)(de)。這些探針(zhen)可以通(tong)(tong)過不同(tong)的(de)(de)方(fang)式制(zhi)備,例如從已知序列的(de)(de)DNA或(huo)RNA制(zhi)備,或(huo)者通(tong)(tong)過使用(yong)生物(wu)信(xin)息(xi)學方(fang)法設計和合成新(xin)的(de)(de)探針(zhen)。

在(zai)進行原(yuan)位(wei)雜交時,細胞或組織需(xu)要固定在(zai)適當的(de)支持物(wu)上,例如載玻片(pian)。然后,探(tan)針與細胞或組織中的(de)DNA或RNA進行雜交,通常是在(zai)加熱條件下進行的(de)。接(jie)下來,通過洗滌和顯影步驟去除(chu)未結(jie)合的(de)探(tan)針和信號增強劑,后用(yong)顯微鏡(jing)觀察雜交信號的(de)位(wei)置(zhi)。

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