一. 原位雜交天

1. 重新水化和固(gu)定(ding)

1） 吸取固定好的胚胎，加(jia)入50%的PBST溶液，放置5分鐘。

2） 置換成30％的PBST溶(rong)液，放置5分鐘

3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一(yi)次

4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶(rong)液固定(ding)20分鐘

5） 用PBST洗兩次，每(mei)次放置五分鐘，室溫。

蛋(dan)白酶處理與后固定（本實驗不(bu)做此步(bu)）

1） 用10ul/ml的(de)蛋白酶K在(zai)室溫下處(chu)理胚(pei)(pei)胎。5體(ti)節(jie)(jie)以(yi)下的(de)胚(pei)(pei)胎不處(chu)理，5體(ti)節(jie)(jie)到24小(xiao)(xiao)時(shi)的(de)胚(pei)(pei)胎處(chu)理3分鐘，24小(xiao)(xiao)時(shi)以(yi)上的(de)胚(pei)(pei)胎處(chu)理5分鐘或者更長(chang)。發(fa)育(yu)時(shi)間(jian)越短的(de)胚(pei)(pei)胎越嫩(nen)，可以(yi)不用或者少(shao)用蛋白酶處(chu)理，發(fa)育(yu)時(shi)間(jian)長(chang)的(de)胚(pei)(pei)胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以(yi)便于雜(za)交(jiao)。

2） 用PBST溶液(ye)輕洗，在PBST中(zhong)放置5分鐘。

3） 用(yong)4％多聚(ju)甲醛的PBS溶(rong)液(ye)固(gu)定20分鐘(zhong)，室溫。

4） 用PBST洗兩次(ci)，每(mei)次(ci)放置五(wu)分鐘(zhong)，動物組織原位雜交，室溫。

怎樣(yang)保證原位雜交(jiao)實驗操作時的溫度?

建(jian)議儀器操(cao)(cao)作，人工(gong)操(cao)(cao)作的話(hua)要注(zhu)意：

（1）對熒(ying)光原(yuan)位雜交(jiao)操作過程中可能使用的一些(xie)儀(yi)器進行(xing)溫控檢查，原(yuan)位雜交(jiao)，不(bu)符合要求的進行(xing)更(geng)換。

（2）盡(jin)可能地保(bao)持環境溫度在20度以上。

（3）針對需(xu)要預熱以達到(dao)要求溫(wen)度的試劑，在使(shi)用前必須使(shi)用溫(wen)度計對其進(jin)行測溫(wen)。

（4）同時檢測的樣本不超過4塊，操作一定要迅速，原位雜交公司，實驗人員要注意一些小部件的溫度，尤其是在冬季。

植物原位雜交除了在遺傳(chuan)育種方面的應(ying)用，還(huan)在其(qi)他領(ling)域(yu)有著廣泛(fan)的應(ying)用，包括：

植(zhi)物基因(yin)表(biao)達模(mo)式研究：通過植(zhi)物原位雜交技術(shu)可以檢測特定(ding)基因(yin)在不(bu)同組織(zhi)或不(bu)同生長條件下(xia)的表(biao)達模(mo)式，植(zhi)物組織(zhi)原位雜交，有助于了(le)解基因(yin)的功能(neng)和作用機制。

植物基因組研究：植物原位雜交技術可以用于基因組研究，例如染色體構象、基因組變異和基因組進化等方面，有助于深入了解植物基因組的特征和結構。