原位雜交第二天

1.

1）將探(tan)針回收，放于－20C保(bao)存(通常探(tan)針可重復使用(yong)十(shi)次左(zuo)右(you))。

2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升(sheng)，60℃，放置30分鐘，重復一次。

3）置換2XSSCT1ml，60℃，放(fang)置15分鐘(zhong)。

4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放(fang)置30分鐘，重(zhong)復一次(ci)。

2.

1）用MABT洗兩次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)五分鐘，放在搖床輕輕搖動。

2）室溫下加(jia)1ml 1：2：7溶液，時間為(wei)一小(xiao)時。

3）按1：3000的(de)比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過夜。

植物(wu)原位雜(za)交除了(le)在遺傳育種方面的(de)應用(yong)，還在其他領域(yu)有著(zhu)廣泛的(de)應用(yong)，動物(wu)組織原位雜(za)交，包(bao)括：

植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)(wu)基(ji)因(yin)研究：植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)(wu)基(ji)因(yin)是一(yi)種利用基(ji)因(yin)工程(cheng)技術來人類遺傳疾病的方(fang)法。通過(guo)植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)(wu)原(yuan)位雜(za)交技術，可以將(jiang)人類基(ji)因(yin)導入到(dao)植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)(wu)細胞中(zhong)，并在植(zhi)(zhi)物(wu)(wu)(wu)細胞中(zhong)表達出相應的蛋白質，為(wei)基(ji)因(yin)提(ti)供重要的物(wu)(wu)(wu)質基(ji)礎(chu)。

植(zhi)(zhi)物抗(kang)(kang)性研究(jiu)：植(zhi)(zhi)物原位(wei)雜交(jiao)技術可(ke)以用于(yu)研究(jiu)植(zhi)(zhi)物對環(huan)(huan)境(jing)脅迫的(de)抗(kang)(kang)性機制(zhi)，例(li)如抗(kang)(kang)旱、抗(kang)(kang)鹽、抗(kang)(kang)病等，有助(zhu)于(yu)了(le)解植(zhi)(zhi)物在環(huan)(huan)境(jing)脅迫下的(de)生理和(he)分子(zi)響(xiang)應機制(zhi)。

植物比較研究：通過植物原位雜交技術可以比較不同植物之間基因表達模式的差異，從而為植物分類和進化研究提供重要的參考依據。

原(yuan)位雜交（In situ hybridazation）

固定

收(shou)集斑馬魚的胚胎，在Holfretor水(shui)中(zhong)培養，到(dao)達所(suo)需要的發育時(shi)期時(shi)，用(yong)(yong)蛋白酶(mei)去除卵膜(mo)，用(yong)(yong)4%多聚甲(jia)醛固定，在4℃保(bao)(bao)存，二十(shi)四小時(shi)后用(yong)(yong)50%2%多聚甲(jia)醛溶液(ye)洗，然后換成，在-20C 保(bao)(bao)存，待(dai)用(yong)(yong)(兩天和兩天以上(shang)的胚胎需要用(yong)(yong)處理，去除色(se)素。或者(zhe)使用(yong)(yong)苯锍(liu)脲稀溶液(ye)培養，可阻(zu)斷(duan)色(se)素的形成)