水稻RNA原位雜交技術服務-科銳諾生物

||| 產品編號：595125585 更新時間：2025-04-03

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后固(gu)(gu)定：胃蛋白(bai)酶消化后才需要。固(gu)(gu)定液(ye)為(wei)1%多聚甲(jia)醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），含有1/1000 DEPC。室溫固(gu)(gu)定 10分鐘(zhong)。蒸餾水洗滌3次。

原位雜交(jiao)的(de)預雜交(jiao)：濕盒的(de)準備——干(gan)的(de)雜交(jiao)盒底(di)部加(jia)20%甘油20ml以(yi)保持濕度。按每(mei)張切片20μι加(jia)預雜交(jiao)液。恒溫箱(xiang)38-42℃2—4小(xiao)時。吸取(qu)多余液體，不洗。

雜(za)(za)交——按每張切(qie)片(pian)20μι雜(za)(za)交液，加在切(qie)片(pian)上(shang)。將原位雜(za)(za)交專(zhuan)1用蓋玻片(pian)的(de)保護膜(mo)揭開后，蓋在切(qie)片(pian)上(shang)。恒溫箱38-42℃雜(za)(za)交過夜(根據雜(za)(za)交情況可以調節)。

雜交后洗(xi)滌(di)(di)：揭掉(diao)蓋玻片(pian)，37℃左右水溫(wen)的2×SSC洗(xi)滌(di)(di)5分鐘×2次(ci)(ci)；37℃0.5×SSC洗(xi)滌(di)(di)15分鐘×1次(ci)(ci); 37℃0.2×SSC洗(xi)滌(di)(di)15分鐘×1次(ci)(ci)(如果有非(fei)特異性(xing)染色，重復0.2×SSC洗(xi)滌(di)(di)15分鐘×1-2次(ci)(ci))。

既要充(chong)分保(bao)留(liu)被測核酸，（特別是RNA）不被降(jiang)解，又(you)要盡可能維持原有組織或細胞的形(xing)態(tai)結構。

步驟：基本與(yu)免(mian)1疫組織化學技術相似，即組織要求(qiu)新鮮和(he)迅速投(tou)入(ru)固(gu)(gu)定液。固(gu)(gu)定液為4%多聚(ju)甲醛/0.1 M PBS（PH7.0-7.6），含(han)有1/1000 DEPC。標本較大(da)時(shi)(shi)用刀片(pian)切成厚度不(bu)超(chao)過(guo)4mm的(de)小(xiao)塊，固(gu)(gu)定1小(xiao)時(shi)(shi)即可，較大(da)的(de)標本固(gu)(gu)定不(bu)要超(chao)過(guo)2小(xiao)時(shi)(shi)。某些組織對(dui)過(guo)度固(gu)(gu)定尤其(qi)敏感，如(ru)動物大(da)腦(nao)，固(gu)(gu)定時(shi)(shi)間30-40分鐘，一般不(bu)要超(chao)過(guo)1小(xiao)時(shi)(shi)。取(qu)材過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)手指、唾液和(he)未經RNA酶抑(yi)制處理的(de)器具接觸標本。冷(leng)凍切片(pian)以厚5~30um佳，40℃烤箱(xiang)內干燥2小(xiao)時(shi)(shi)后儲存在-80℃超(chao)低溫(wen)冰箱(xiang)，在-20℃可保(bao)存２～３周，在-70℃可保(bao)存數月之久。

熒光定量PCR(realtimePCR)技術是近幾年基于普通PCR技術發展的一種新技術。它借助熒光信號來檢測PCR產物，通過熒光染料或熒光標記的特異探針，對PCR產物進行標記跟蹤，水稻RNA原位雜交技術服務，在擴增過程中，每經過一次循環，熒光定量PCR儀就會收集一次熒光信號，實時檢測整個PCR進程。用熒光定量PCR法檢測目的基因僅需檢測樣本是否具有擴增信號即可，且PCR反應具有核酸擴增的高1效性，可檢測出微小突變。根據探針標記不同可分為TaqMan探針法和AＲMS法。水稻RNA原位雜交技術服務-科銳諾生物由武漢科銳諾生物科技有限公司提供。武漢科銳諾生物科技有限公司位于湖北省武漢市江夏區神墩四路666號武漢國英種子A棟1樓。在市場經濟的浪潮中拼博和發展，目前科銳諾在技術合作中享有良好的聲譽。科銳諾取得全網商盟認證，標志著我們的服務和管理水平達到了一個新的高度。科銳諾全體員工愿與各界有識之士共同發展，共創美好未來。

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