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組(zu)織原位雜(za)(za)交(Tissue in situ hybridization),即原位雜(za)(za)交組(zu)織化(hua)學(xue)(xue)技(ji)術和原位雜(za)(za)交細(xi)胞化(hua)學(xue)(xue)技(ji)術
原位雜交技術(shu)的基(ji)本原理
利用核(he)酸分子(zi)單鏈(lian)之(zhi)間有互補的堿基(ji)順序,通過堿基(ji)對(dui)之(zhi)間非(fei)共價(jia)鍵的形成,出現穩定的雙鏈(lian)區(qu),形成雜交的雙鏈(lian)。
1.兩條核苷酸(suan)單(dan)鏈片段,在(zai)適(shi)宜的條件(jian)下,通過(guo)氫(qing)鍵(jian)結(jie)合,形(xing)成DNA-DNA、DNA一(yi)RNA或RNA一(yi)RNA雙鍵(jian)分子
2.應(ying)用帶有標記的(有性同位素,如3H、35S、32P,熒光素、生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸(suan)探針(zhen),與組織(zhi)切片或細胞內待測核酸(suan)(RNA或DNA)片段進(jin)行雜交
3.用自(zi)顯(xian)影等方法予以顯(xian)示,在光鏡或電鏡下觀察(cha)目的(de)mRNA或DNA的(de)存在與(yu)定位
用原位(wei)雜(za)交(jiao)術,可在原位(wei)研(yan)究細胞合(he)成某種多肽或蛋白(bai)質的基因表達。
此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
原位雜交技術在許(xu)多領域都有應用,以下是(shi)其(qi)中幾個具體(ti)應用:
細(xi)胞(bao)(bao)生物(wu)學(xue)和發(fa)育生物(wu)學(xue):在(zai)細(xi)胞(bao)(bao)生物(wu)學(xue)和發(fa)育生物(wu)學(xue)領(ling)域,原位雜交技術常被用(yong)于研究基因(yin)的(de)表達和定(ding)位。例如,通過(guo)標記特(te)定(ding)基因(yin)的(de)探針,可以在(zai)細(xi)胞(bao)(bao)或組織中檢測特(te)定(ding)基因(yin)序列的(de)存在(zai)和分(fen)布,進而(er)了解基因(yin)在(zai)細(xi)胞(bao)(bao)分(fen)化、發(fa)育和功能中的(de)作用(yong)。
基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)組學和遺傳(chuan)學研究:原(yuan)位(wei)雜交(jiao)技(ji)術也可(ke)用于基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)組學和遺傳(chuan)學研究。例(li)如,通過(guo)標記多(duo)個基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)探針,可(ke)以檢測基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)組中的(de)多(duo)個基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)序列(lie),從而進(jin)行基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)定(ding)位(wei)、基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)表達譜分(fen)析、基(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)(yin)突變檢測等研究。
病(bing)(bing)毒學(xue)和(he)病(bing)(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)研究(jiu):在(zai)病(bing)(bing)毒學(xue)和(he)病(bing)(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)領域,原位(wei)雜(za)交技術(shu)常被用于檢測和(he)定位(wei)病(bing)(bing)毒、細菌等病(bing)(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)。例如,通過標記(ji)特(te)異性或核酸探針,可以(yi)檢測組織(zhi)中病(bing)(bing)原微(wei)生(sheng)物(wu)的存在(zai)、情況(kuang)以(yi)及分布特(te)征,從而(er)為疾病(bing)(bing)的預防、診斷(duan)和(he)提供依據。
總(zong)之,原(yuan)位雜交(jiao)技術(shu)在(zai)生(sheng)物學(xue)、醫學(xue)、基因組學(xue)、遺傳學(xue)、病(bing)毒學(xue)和病(bing)原(yuan)微生(sheng)物學(xue)等領域都有(you)(you)廣(guang)泛的應用價值,為人類認識生(sheng)命(ming)現象、探究疾病(bing)機制和提供了有(you)(you)力的技術(shu)支持(chi)。
植(zhi)物原位雜交在遺傳育種方面(mian)的應(ying)用主(zhu)要包括:
檢測(ce)物(wu)(wu)種(zhong)(zhong)或(huo)品種(zhong)(zhong)特異性:通過(guo)植物(wu)(wu)原位雜交技術可以(yi)檢測(ce)出不同物(wu)(wu)種(zhong)(zhong)或(huo)品種(zhong)(zhong)之間基因表達(da)的(de)差異,從而為物(wu)(wu)種(zhong)(zhong)或(huo)品種(zhong)(zhong)特異性研(yan)究提供依(yi)據。
遺傳育種:通過植物原位雜交技術可以檢測到不同品種之間基因表達的差異,染色體原位雜交,從而為遺傳育種提供重要的參考信息。例如,通過將特定的外源基因導入到植物細胞中,然后利用原位雜交技術檢測該基因在植物細胞中的位置和表達情況,為遺傳育種提供重要的參考信息。
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