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原位雜交第三天
1) ? ? ? ?用(yong)(yong)1ml含10%熱滅清的MABT溶液(ye)置(zhi)(zhi)換溶液(ye),放置(zhi)(zhi)搖床上(shang)25分鐘(zhong),然(ran)后用(yong)(yong)1mlMABT置(zhi)(zhi)換,25分鐘(zhong),再(zai)用(yong)(yong)1mlMABT溶液(ye)置(zhi)(zhi)換,一小時以上(shang),后用(yong)(yong)1mlMABT溶液(ye)置(zhi)(zhi)換,25分鐘(zhong)。
2) ? ? ? ?用1ml 1mM左旋(xuan)米(mi)睉的Staining buffer洗三(san)次,每次放置五分(fen)鐘。
3)將(jiang)胚胎(tai)轉入十(shi)六(liu)孔板中,吸去(qu)staining buffer,加(jia)上300ul BM Purple AP Substrate(底物,用之前加(jia)5mM左旋米唑),十(shi)六(liu)孔板外面(mian)包上錫箔(bo)紙以避光,植物組織原位(wei)雜交,避免(mian)搖動,室溫(wen)下(xia)顯色。
4)每隔(ge)一小時觀察胚胎是否開(kai)始(shi)顯色
5)將(jiang)顯色完全的胚胎(tai)中的底(di)物吸出,用PBST洗兩三次后(hou)加(jia)上4%多聚(ju)甲醛(quan)固定,拍照。
6)4C冰箱保存。
原位(wei)雜交技術的應用領(ling)域(yu)
原位雜交技術在醫學、農業和工業等領域都有廣泛的應用。在醫學方面,原位雜交技術可用于檢測癌細胞、病毒和細菌等致病微生物,幫助醫生制定的診斷和方案。在農業方面,原位雜交技術可用于基因定位、品種鑒定和遺傳育種等領域,提高農作物的產量和品質。在工業方面,原位雜交技術可用于檢測基因工程產品中的外源DNA,保證產品的安全性和穩定性。
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