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原(yuan)位雜交技術可(ke)以(yi)應用于以(yi)下場景:
組織中(zhong)病(bing)毒(du)(du)DNA/RNA的檢測和(he)定位。例如,可以(yi)用于檢測EB病(bing)毒(du)(du)mRNA、人(ren)類狀瘤(liu)病(bing)毒(du)(du)和(he)巨細胞(bao)病(bing)毒(du)(du)DNA等。
癌基(ji)因、抑癌基(ji)因及其他各種(zhong)功能基(ji)因在轉錄水平的(de)表(biao)達及其變化的(de)檢測。
檢測染(ran)色體(ti)的變(bian)化,如染(ran)色體(ti)數(shu)量異常和染(ran)色體(ti)易(yi)位等(deng)。
在植物基因組研究中的應用。例如,熒光原位雜交,通過與特定基因序列的探針進行雜交,可以在植物染色體上定位到目標基因的位置,進而構建遺傳圖譜,為植物育種和基因組研究提供基礎數據。
將(jiang)32 P標記的(de)雙(shuang)鏈(lian)DNA探針于100℃加熱5分鐘(zhong),迅速置(zhi)于冰浴中。單鏈(lian)探針不(bu)必變性。將(jiang)探針加到雜交(jiao)袋中雜交(jiao)過夜。雜交(jiao)期(qi)間,盛濾膜的(de)容器應蓋(gai)嚴,以(yi)防液體蒸(zheng)發(fa)。
雜交(jiao)結(jie)束后(hou),去(qu)除雜交(jiao)液,立即于室溫把濾膜(mo)放入大體積(ji)(300-500ml)的(de)2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕(qing)輕(qing)振(zhen)搖5分鐘,并將濾膜(mo)至少翻轉一次(ci)。重復(fu)洗 一次(ci),同時應避(bi)免膜(mo)干涸(he)。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進行自顯影。如背景很高或實驗要求嚴格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
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