RNA原位雜交測試服務-武漢科銳諾生物(圖)

||| 產品編號：595249855 更新時間：2025-04-06

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基因芯片又稱DNA芯片或DNA微陣列。其原理是在固體載體(硅片、玻片、硝1酸纖維素膜)上按照特定的排列方式集成大量已知DNA/cDNA片段，形成DNA/cDNA微矩陣。　　基因芯片技術是一門新興的技術，由于該技術能在一次實驗中自動、快速、敏感地同時檢測數千條序列，而且獲得的序列信息高度特異、穩定。根據探針類型分為DNA芯片和cDNA芯片，前者用于檢測基因突變，實現腫1瘤早期診斷、判斷預后及治1療;后者用于檢測基因表達，對腫1瘤進行發現性分類和預測性分類。

.雜交　（1）盛有2×SSC的塑料盤同，將干烤的濾膜飄浮在液面上，浸濕5分鐘。（2）將濾膜轉到200ml預洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起，放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿，放到位于培養箱內的旋轉平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中，RNA原位雜交測試服務，應緩緩搖動濾膜，防止它們粘在一起。（3）用泡過預洗液的吸水棉紙輕輕地從膜表面拭去細菌碎片，以降低雜交背景而不影響陽性雜交信號的強度和清晰度。（4）將濾膜轉到盛有150ml預雜交液的玻璃中，在適宜溫度（即在水溶液中雜交時用68℃，而在50%甲酰胺中雜交時用42℃）下，預雜交1-2小時。（5）將32 P標記的雙鏈DNA探針于100℃加熱5分鐘，迅速置于冰浴中。單鏈探針不必變性。將探針加到雜交袋中雜交過夜。雜交期間，盛濾膜的容器應蓋嚴，以防液體蒸發。

原位雜交天

1. 重新水(shui)化和固定

1）吸取固定好的(de)胚(pei)胎，加入50%的(de)PBST溶液(ye)，放置5分(fen)鐘(zhong)。

2）置換成30%的PBST溶液，放置5分鐘

3）置(zhi)換成PBST溶(rong)液，放置(zhi)5分(fen)鐘，重復(fu)一次

4）置換成4%多聚(ju)甲醛(quan)的PBS溶液固定20分(fen)(fen)鐘5）用PBST洗兩次，每次放置五分(fen)(fen)鐘，室溫。

蛋白酶處理與后(hou)固定（本實驗不做此步(bu)）

1）用10ul/ml的(de)蛋(dan)白(bai)酶K在室溫下處(chu)理(li)胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)。5體節(jie)以(yi)下的(de)胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)不(bu)處(chu)理(li)，5體節(jie)到24小時的(de)胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)處(chu)理(li)3分(fen)鐘，24小時以(yi)上的(de)胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)處(chu)理(li)5分(fen)鐘或者(zhe)更長(chang)。發(fa)育時間越短的(de)胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)越嫩，可(ke)以(yi)不(bu)用或者(zhe)少用蛋(dan)白(bai)酶處(chu)理(li)，發(fa)育時間長(chang)的(de)胚(pei)(pei)(pei)胎(tai)(tai)就需要用蛋(dan)白(bai)酶來疏松組(zu)織，以(yi)便于雜交。

2）用PBST溶液(ye)輕洗(xi)，在PBST中放置(zhi)5分(fen)鐘。

3）用(yong)4%多聚(ju)甲醛的(de)PBS溶液固定20分鐘(zhong)，室溫(wen)。

4）用PBST洗兩次，每次放(fang)置五分鐘(zhong)，室溫。

2. 預雜交

1）每個管中置(zhi)換成(cheng)大約300ulHYB－溶液(ye)，60℃水浴5分(fen)鐘，避(bi)免(mian)振蕩。

2）用等體積(ji)的(de)HYB+取代(dai)HYB－。

3）60℃水浴，預雜交4小時以上。

3. 雜交

1）吸去預雜(za)交的HYB+，加上100ul已加入探(tan)針(zhen)的HYB+溶液（探(tan)針(zhen)濃度約為1ng/ul）..

2）60℃ 溫(wen)浴過夜。注：雜交與預(yu)雜交的(de)溫(wen)度(du)可以是55到60度(du)不等(deng)，溫(wen)度(du)越(yue)低，探(tan)針(zhen)結合越(yue)好，溫(wen)度(du)越(yue)高，背景越(yue)小。

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