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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原(yuan)位雜交(jiao),亞細胞(bao)定位,蛋白互作,啟動子篩(shai)選(xuan)
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| 先生： |
在(zai)原位雜交過程中，需要使用(yong)(yong)標(biao)記的(de)(de)核酸探針，染(ran)色體熒(ying)光原位雜交，通(tong)常是(shi)在(zai)性(xing)核素或(huo)非性(xing)物(wu)質中標(biao)記的(de)(de)。這(zhe)些探針可(ke)以通(tong)過不(bu)同的(de)(de)方式制備，例如從(cong)已知序列的(de)(de)DNA或(huo)RNA制備，或(huo)者通(tong)過使用(yong)(yong)生(sheng)物(wu)信息學(xue)方法設(she)計和合成新的(de)(de)探針。
在(zai)進(jin)行(xing)原(yuan)位雜(za)交(jiao)(jiao)時，細胞或組織(zhi)需要(yao)固定在(zai)適當的(de)(de)支持物上，例如載(zai)玻片。然后，探針與細胞或組織(zhi)中的(de)(de)DNA或RNA進(jin)行(xing)雜(za)交(jiao)(jiao)，通(tong)常是(shi)在(zai)加熱條件下進(jin)行(xing)的(de)(de)。接下來(lai)，通(tong)過洗滌和(he)顯(xian)影步驟去除未結合的(de)(de)探針和(he)信號增強劑，后用顯(xian)微鏡(jing)觀察(cha)雜(za)交(jiao)(jiao)信號的(de)(de)位置。
原位雜交第二天
1.
1）將探針(zhen)回收(shou)，放(fang)于－20C保(bao)存(通常探針(zhen)可重復使用(yong)十次(ci)左(zuo)右(you))。
2）加入50%甲酰(xian)胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放(fang)置30分鐘，重復一次。
3）置(zhi)換2XSSCT1ml，60℃，放置(zhi)15分(fen)鐘。
4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放(fang)置30分(fen)鐘，重復一次。
2.
1）用MABT洗(xi)兩次(ci)，每次(ci)五分鐘，放在搖床(chuang)輕輕搖動。
2）室溫(wen)下(xia)加1ml 1：2：7溶液，時間為一小時。
3）按1：3000的(de)比例在1：2：7溶液中加(jia)入酶(mei)連，4C 冰箱(xiang)過夜。
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第3年
